Question

10．如圖所示是將某細菌的基因A導入大腸桿菌內，制備“工程菌”的示意圖．

請據圖回答：
（1）制備“工程菌”的基本操作程序主要包括四個步驟，其中的核心步驟是構建重組DNA分子．
（2）若A為未知的目的基因，獲得A常用的方法是建立（一個包括目的基因在內的）基因文庫．
（3）A、B形成C的過程中，需要的工具酶有限制性核酸內切酶和DNA連接酶．為了利于C進入D，常用CaCl₂溶液（或Ca²⁺）處理D．
（4）制備所得的“工程菌”用LB液體培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)，操作過程中要用蛋白胨和酵母提取物來配制該培養(yǎng)基，還要加入一定量的氯化鈉，以維持一定的滲透壓；培養(yǎng)基使用前必須用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌處理．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是將某細菌的基因A導入大腸桿菌內，制備“工程菌”的示意圖，其中A為目的基因，B為運載體（質粒），C為重組質粒，D為受體細胞．

解答 解：（1）基因工程的操作步驟包括：目的基因的獲取、基因表達載體的構建、目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測和鑒定，其中基因表達載體的構建（構建重組DNA分子）是基因工程的核心步驟．
（2）若A為未知的目的基因，獲得A常用的方法是建立（一個包括目的基因在內的）基因文庫．
（3）目的基因、質粒形成重組質粒的過程中，需要的工具酶有限制性核酸內切酶和DNA連接酶．為了利于重組質粒進入受體細胞，并且受體細胞為微生物，常用CaCl₂溶液（或Ca²⁺）處理D，使D處于感受態(tài)．
（4）制備所得的“工程菌”用LB液體培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)，操作過程中要用蛋白胨和酵母提取物來配制該培養(yǎng)基，還要加入一定量的氯化鈉，以維持一定的滲透壓；培養(yǎng)基使用前必須用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌處理．
故答案為：
（1）構建重組DNA分子
（2）建立（一個包括目的基因在內的）基因文庫
（3）限制性核酸內切酶  DNA連接酶；CaCl₂溶液（或Ca²⁺）
（4）液體培養(yǎng)基    蛋白胨  酵母提取物   氯化鈉   高壓蒸汽滅菌法

點評 本題結合制備“工程菌”的示意圖，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握步驟中的相關細節(jié)，能結合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．