Question

【題目】下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術(shù)路線。圖中分別表示：tetR為四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉索抗性基因，以及BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點。

據(jù)圖回答：

（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用____________限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調(diào)控序列是____________。過程①可采用的操作方法是____________。為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用____________技術(shù)。

（2）過程②采用的生物技術(shù)是____________。在此之前，需要對代孕牛經(jīng)過__________處理后，使之與供體的生理狀況保持相同。如果對胚胎進行性別鑒定，可選用囊胚期的___________細胞進行鑒定。

（3）用PCR技術(shù)擴增目的基因，其原理與細胞內(nèi)DNA復制類似（如下圖所示）。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。

①PCR技術(shù)擴增目的基因時從理論上推測，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為_______。

②在第____________輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。

Answer 1

【答案】 Hind Ⅲ和BamH Ⅰ 啟動子 顯微注射技術(shù) 抗原一抗體雜交 胚胎移植技術(shù) 同期發(fā)情 滋養(yǎng)層 15/16 三

【解析】試題分析：圖中顯示，該項技術(shù)應用了基因工程和胚胎工程的相關(guān)操作。據(jù)圖，僅將人乳鐵蛋白基因切割下來，需要在人乳鐵蛋白基因的左側(cè)用BamHⅠ切割，右側(cè)用HindⅢ切割。當人乳鐵蛋白基因和質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒后，tetR基因被人乳鐵蛋白基因隔開，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行。

（1）要將人的乳鐵蛋白基因切割下來需要Hind Ⅲ和BamHⅠ，同時也要用這兩種酶處理質(zhì)粒，以便構(gòu)建重組質(zhì)粒。而啟動子是基因表達調(diào)控的起始序列。將目的基因?qū)�入動物細胞一般采用顯微注射法；而人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用抗原抗體雜交技術(shù)，檢測牛奶中是否含有人乳鐵蛋白。

（2）過程②采用的生物技術(shù)是胚胎移植技術(shù)。在此之前，需要對代孕牛經(jīng)過同期發(fā)情處理后，使之與供體的生理狀況保持相同。如果對胚胎進行性別鑒定，可選用囊胚期的滋養(yǎng)層細胞進行鑒定。

（3）①PCR技術(shù)擴增目的基因從理論上推測，每一次循環(huán)產(chǎn)物中不含引物A的DNA只有如圖的最下面一個，其它的DNA均含有引物A，第四輪循環(huán)下來共得到16個DNA，含引物A的DNA片段所占的比例為15/16。

②在第三輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。