Question

6．如圖是分離、純化及保存枯草芽抱桿菌菌株的過程示意圖：將土壤表層土稀釋液煮沸巧分鐘（枯草芽抱桿菌的芽抱不會失去活性）靜置5分鐘后獲得樣品，進(jìn)行如下操作：

請回答下列問題：
（1）由題意可知，除用選擇培養(yǎng)基外，還有煮沸操作起到篩選作用．
（2）上圖的劃線操作中，培養(yǎng)基從物質(zhì)狀態(tài)分類上屬于固體培養(yǎng)基，接種環(huán)用灼燒滅菌（灼燒）法進(jìn)行滅菌，劃線過程中第一區(qū)和最后一區(qū)的劃線不能（能/不能）相連．
（3）用稀釋涂布平板法在5個培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為10⁴的樣品液0.1ml，培養(yǎng)一段時間后，平板長出來的菌落數(shù)分別為13.160，532，175和187．每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)量為1.74×10⁷個．
（4）用上述方法統(tǒng)計(jì)出的菌落數(shù)往往比樣品中活菌的實(shí)際數(shù)目少，原因是兩個或者多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
 ①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)； ③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）
 ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性．
b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．
③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．

解答 解：（1）根據(jù)題干信息“將土壤表層土稀釋液煮沸巧分鐘（枯草芽抱桿菌的芽抱不會失去活性）”可知，除用選擇培養(yǎng)基外，還有煮沸操作起到篩選作用．
（2）上圖的劃線操作中，培養(yǎng)基從物質(zhì)狀態(tài)分類上屬于固體培養(yǎng)基；接種環(huán)用灼燒滅菌（灼燒） 法進(jìn)行滅菌；劃線過程中第一區(qū)和最后一區(qū)的劃線不能相連．
（3）用稀釋涂布平板法在5個培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為10⁴的樣品液0.1ml，培養(yǎng)一段時間后，平板長出來的菌落數(shù)分別為13，160，532，175和187．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，因此每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)量為=$\frac{160+175+187}{3}$×$\frac{1}{0.1}$×10⁴=1.74×10⁷個．
（4）由于兩個或者多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因此用上述方法統(tǒng)計(jì)出的菌落數(shù)往往比樣品中活菌的實(shí)際數(shù)目少．
故答案為：
（1）煮沸
（2）固體培養(yǎng)基    灼燒滅菌（灼燒）     不能
（3）1.74×10⁷
（4）少    兩個或者多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落

點(diǎn)評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記接種微生物常用的兩種方法；識記無菌技術(shù)；識記計(jì)數(shù)微生物常用的方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．