Question

8．抗凝血酶Ⅲ蛋白是一種血漿糖蛋白，臨床上主要用于血液性疾病的治療．下圖為培育轉(zhuǎn)基因奶牛獲得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程．回答問(wèn)題：

（1）已知抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的堿基對(duì)序列，獲得目的基因的方法是以從基因文庫(kù)中獲取或利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，擴(kuò)增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因經(jīng)常采用PCR技術(shù)技術(shù)．構(gòu)建基因表達(dá)載體所用的工具酶有限制酶、DNA連接酶．
（2）過(guò)程①是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，該過(guò)程常用的方法是顯微注射法．選擇受精卵作為目的基因的受體細(xì)胞的主要原因是受精卵的全能性最高；過(guò)程②包括早期胚胎培養(yǎng)（或“動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)”） 技術(shù)和胚胎移植技術(shù)；可用
胚胎分割技術(shù)獲得多只與該轉(zhuǎn)基因奶牛遺傳物質(zhì)相同的牛犢．
（3）對(duì)胚胎進(jìn)行分割移植時(shí)，胚胎應(yīng)發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段．胚胎在受體內(nèi)存活的原因，可能是受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)．對(duì)受體動(dòng)物的處理是用促性腺激素對(duì)受體進(jìn)行同期發(fā)情處理．
（4）若要檢測(cè)牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（5）如果檢測(cè)發(fā)現(xiàn)抗凝血酶Ⅲ蛋白基因被導(dǎo)入了受精卵，但卻沒(méi)有檢測(cè)到抗凝血酶Ⅲ蛋白的存在，那應(yīng)該考慮分別位于目的基因首端和端的啟動(dòng)子和終止子沒(méi)有設(shè)計(jì)好，應(yīng)從這方面考慮改善．

Answer 1

分析 獲得目的基因的方法：①?gòu)幕�因文�?kù)中獲取：②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增：③人工合成：這種方法有兩條途徑，一是以目的基因轉(zhuǎn)錄的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，再在酶的作用下合成雙鏈DNA，即目的基因；另一條途徑是蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測(cè)出信使RNA序列，再推測(cè)出結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，然后用化學(xué)的方法以單核苷酸為原料合成．

解答 解：（1）已知抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的堿基對(duì)序列，可以從基因文庫(kù)中獲取或利用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲取目的基因，利用PCR技術(shù)能在體外大量擴(kuò)增目的基因（抗凝血酶Ⅲ蛋白基因）．基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，該過(guò)程需要限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組質(zhì)粒．
（2）過(guò)程①是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，常用的方法是顯微注射法．利用PCR技術(shù)能擴(kuò)增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因．過(guò)程②是受精卵需要經(jīng)過(guò)早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)和胚胎移植技術(shù)，可用胚胎分割技術(shù)獲得多只與該轉(zhuǎn)基因奶牛遺傳物質(zhì)相同的牛犢．
（3）胚胎移植時(shí)，受體應(yīng)處于適合的生理狀況，此時(shí)可利用促性腺激素對(duì)受體進(jìn)行同期發(fā)情處理．此外，受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能．一般等到胚胎發(fā)育到桑葚胚或囊胚時(shí)，進(jìn)行胚胎移植．
（4）若要檢測(cè)牛奶中是否含有人血清白蛋白，這屬于翻譯水平的檢測(cè)，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（5）基因表達(dá)載體由啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因組成．啟動(dòng)子位于首端，終止子位于尾端．
故答案為：
（1）以從基因文庫(kù)中獲取或利用PCR技術(shù)擴(kuò)增    PCR技術(shù)    限制酶  DNA連接酶
（2）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞   顯微注射法  受精卵的全能性最高  早期胚胎培養(yǎng)（或“動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)”）  胚胎分割
（3）桑葚胚或囊胚     免疫排斥反應(yīng)   促性腺激素對(duì)受體
（4）抗原-抗體雜交
（5）啟動(dòng)子和終止子

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記胚胎移植的基本程序和胚胎分割技術(shù)的特點(diǎn)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．