Question

下圖(一)為某基因工程中利用的質(zhì)粒筒圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點，amp^R為青霉素(抗生素)抗性基因，tct^R為四環(huán)素(抗生素)抗性基因，P為啟動因子，T為終止子，ori為復(fù)制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點。下圖(二)為幾種酶作用于基因的位置。請回答下列問題：

(1)在基因工程中常用的工具有三種：一是用作切取目的基因的_________酶；二是將目的基因與運載體拼接的_________酶；三是作為運載體的質(zhì)粒。
(2)將含有目的基因的DNA與經(jīng)特定的酶切后的動載體(質(zhì)粒)進行拼接形成重組DNA，理論上講，重組DNA可能有“____________”、“____________”、“___________”三種，其中有效的(所需要的)基因表達載體是____________，因此需要對這些拼接產(chǎn)物進行分離提純。
(3)利用圖(一)所示的質(zhì)粒拼接形成的3種拼接產(chǎn)物(基因表達載體)與無任何抗藥性的原核宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的拼接產(chǎn)物(基因表達載體)是_______。
(4)有效的基因表達載體成功導(dǎo)入受體細胞進行表達時，首先需要進行轉(zhuǎn)錄，RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點是圖(一)中的________。在動物基因工程中，將基因表達載體導(dǎo)入受體細胞的常用方法是________。在植物基因工程中，將基因表達載體導(dǎo)入受體細胞的常用方法是_________。是因為這種微生物很容易侵染到_________中，從而把它的Ti質(zhì)粒上的_________轉(zhuǎn)移到受體細胞染色體的DNA上。
(5)在基因工程中，作用于圖(二)所示a位置的酶是____________；作用于b位置的酶是____________。

Answer 1

(1)限制(限制性核酸內(nèi)切酶)      DNA連接
(2)目的―目的基因  目的基因―運載體   運載體―運載體   目的基因―動載體
(3)運載體―運載體和目的基因―運載體
(4)P(啟動子)      顯微注射法    農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法    雙子葉植物和裸子植物      T-DNA
(5)限制酶(限制性內(nèi)切酶)       DNA解旋酶