Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜細胞并獲得了轉基因油菜品種。

（1）研究人員依據基因的已知序列設計引物，采用 技術從陸地棉基因文庫中獲取酶

D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因，所含三種限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切

點如下圖所示。則用 和 酶處理兩個基因后，可得到 端與

端（填圖中字母）相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入右上圖所示Ti質粒的T-DNA中，構建 并導入農桿菌中。將獲得的農桿菌接種在含 的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的侵染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是 。

（4）進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，該細胞通過 技術，可培育成轉基因油菜植株。用 法在分子水平上可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達。

Answer 1

【答案】（1）PCR ClaⅠ DNA連接 A D

（2）基因表達載體（或“重組質粒”） 四環(huán)素

（3）利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞 植物組織培養(yǎng)

（4）抗原—抗體雜交

【解析】（1）研究人員依據基因的已知序列設計引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因．在上述引物設計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．

（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質粒的T-DNA中，構建表達載體即重組質粒并導入農桿菌中．將獲得的農桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的浸染液．

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉基因油菜．

（4）用抗原-抗體雜交法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．