Question

【題目】胰島素A、B鏈分別表達法是生產(chǎn)胰島素的方法之一。圖1是該方法所用的基因表達載體，圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產(chǎn)人胰島素的基本流程（融合蛋白A、B分別表示β-半乳糖苷酶與胰島素A、B鏈融合的蛋白）。請回答下列問題：

（1）圖1基因表達載體中沒有標注出來的基本結(jié)構(gòu)是_____________________。

（2）圖1中啟動子是________酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能啟動目的基因的表達；氨芐青霉素抗性基因的作用是_________________________。

（3）構(gòu)建基因表達載體時必需的工具酶有___________________。

（4）β-半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達，可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點隱藏在內(nèi)部，其意義在于_____________________________。

Answer 1

【答案】終止子 RNA聚合 作為標記基因，將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來 限制酶和DNA連接酶 防止胰島素的A、B 鏈被菌體內(nèi)蛋白酶降解

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因：DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA：分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）根據(jù)題意和圖示分析可知：圖1基因表達載體中已有目的基因、啟動子和標記基因，所以沒有標注出來的基本結(jié)構(gòu)是終止子。

（2）圖1中啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能啟動目的基因的表達即轉(zhuǎn)錄過程；氨芐青霉素抗性基因的作用是作為標記基因，將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來。

（3）構(gòu)建基因表達載體時必需的工具酶有限制酶和DNA連接酶。

（4）β-半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達，可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點隱藏在內(nèi)部，這樣可以防止胰島素的A、B鏈被菌體內(nèi)蛋白酶降解。