Question

科學(xué)家將外源目的基因與大腸桿菌的質(zhì)粒進(jìn)行重組，并在大腸桿菌中成功表達(dá)。下圖表示構(gòu)建重組質(zhì)粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過程。請(qǐng)據(jù)圖回答問題：

（1）步驟①和②中常用的工具酶是                   和                 。

（2）圖中質(zhì)粒上有抗氨芐青霉素和抗四環(huán)素兩個(gè)標(biāo)記基因，經(jīng)過①和②步驟后，有些質(zhì)粒上的                        基因內(nèi)插入了外源目的基因，形成重組質(zhì)粒，由于目的基因的分隔使得該抗性基因失活。

（3）步驟③是                                        的過程，為了促進(jìn)該過程，應(yīng)該用           處理大腸桿菌。

（4）步驟④：將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基C上培養(yǎng)，目的是篩選     ，能在C中生長的大腸桿菌有        種。

（5）步驟⑤：用無菌牙簽挑取C上的單個(gè)菌落，分別接種到D（含氨芐青霉素和四環(huán)素）和E（含四環(huán)素）兩個(gè)培養(yǎng)基的相同位置上，一段時(shí)間后，菌落的生長狀況如圖所示，含目的基因的菌落位于          （D、E）上。請(qǐng)?jiān)趫D中相應(yīng)的位置上圈出含目的基因的菌落。

Answer 1

（1）限制性核酸內(nèi)切酶   DNA連接酶

（2）氨芐青霉素抗性基因

（3）將重組質(zhì)粒（目的基因）導(dǎo)入大腸桿菌（受體細(xì)胞）  CaCl₂溶液

（4）含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌（含抗性基因的大腸桿菌給分，但回答含目的基因的大腸桿菌不給分）    2

（5）E