Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）回答與微生物培養(yǎng)及應(yīng)用有關(guān)的問題：

（1）在利用微生物時(shí)，為消除污染雜菌，通用的方法是______。培養(yǎng)微生物時(shí)需要對(duì)各種用具進(jìn)行滅菌，置于超凈臺(tái)上的用具可利用____滅菌30分鐘。

（2）米酒釀造過程中，常利用黑曲霉使淀粉糖化，原因是黑曲霉能分泌α-淀粉酶、β淀粉酶及____酶，可以將淀粉分解為葡葡糖。黑曲霉使米飯中淀粉糖化所需的發(fā)酵條件是___ （A.有氧和較高溫度 B.有氧和較低溫度 C.無氧和較高溫度 D.無氧和較低溫度）。

（3）尿素固體培養(yǎng)基可用于分離產(chǎn)______的細(xì)菌，尿素分解為氨后被細(xì)菌吸收可用于合成_______________（答出2點(diǎn)即可）。

（4）以稀釋的果酒為原料發(fā)酵制作果醋，果醋中醋酸濃度一般不超過5%。其主要原因是當(dāng)發(fā)酵液中的醋酸濃度接近5%時(shí)_______，不能繼續(xù)生成醋酸。果醋發(fā)酵完畢后可以在發(fā)酵液中加入一定濃度的食鹽并密封，目的是__________，以免醋酸進(jìn)一步氧化分解。

（二）回答與利用生物技術(shù)培育抗鹽品種有關(guān)的問題：

（1）為獲得大量抗鹽基因，可將其連接到質(zhì)粒上，通過大腸桿菌培養(yǎng)擴(kuò)增，原因是質(zhì)粒具有_______________的特點(diǎn)。

（2）用兩種不同的限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因，再用這兩種酶切割農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，可以防止_______，從而提高目的基因和質(zhì)粒重組的成功率。用DNA連接酶連接目的基因和Ti質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低溫度，原因是溫度較低有利于_________，使不同DNA分子片段更容易連接在一起。

（3）將重組質(zhì)粒通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，可取植物葉片經(jīng)______后，剪成小片作為轉(zhuǎn)基因的受體材料。之所以不用完整的葉片，一方面是由傷口有利于_______，再者傷口也有利于組織培養(yǎng)時(shí)_________的形成。

（4）抗鹽品種的培養(yǎng)不一定需要基因工程技術(shù)，也可利用______技術(shù)，在培養(yǎng)基中加入不同濃度的NaCl，誘發(fā)和篩選_______。

Answer 1

【答案】進(jìn)行單菌落分離（劃線分離/涂布分離） 紫外線（紫外燈） 糖化淀粉酶 A 脲酶 蛋白質(zhì)、核酸 乙醇消耗完畢（底物消耗完畢） 抑制醋酸桿菌（殺死醋酸桿菌） 自主復(fù)制且在細(xì)菌中穩(wěn)定存在（寫出“自主復(fù)制”即可） 目的基因或質(zhì)粒自身環(huán)化 粘性末端之間形成氫鍵（氫鍵的形成） 消毒 農(nóng)桿菌侵染植物組織 愈傷組織 植物細(xì)胞培養(yǎng) 抗鹽突變體

【解析】

（一）單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達(dá)量菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。在利用微生物時(shí)，常要求所利用的微生物不被其他微生物污染，因此需要進(jìn)行無菌操作，對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿也需要進(jìn)行滅菌，常用的滅菌方法包括高壓蒸汽滅菌法、紫外滅菌法等。利用微生物進(jìn)行發(fā)酵時(shí)，需要考慮所選菌種的生長(zhǎng)特性進(jìn)而設(shè)置發(fā)酵條件。

（二）基因工程的工具包括：限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶、質(zhì)粒�；�因工程的基本步驟包括：獲得目的基因、形成重組DNA分子、將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞、篩選含有目的基因的受體細(xì)胞、目的基因的表達(dá)。

（一）（1）在利用微生物時(shí)，為消除污染雜菌，通用方法的是單菌落的分離；培養(yǎng)微生物時(shí)需要對(duì)各種用具進(jìn)行滅菌，置于超凈臺(tái)上的用具可利用紫外線（紫外燈）滅菌30分鐘。

（2）米酒釀造過程中，常利用黑曲霉使淀粉糖化，原因是黑曲霉能分泌α-淀粉酶、β-淀粉酶及糖化淀粉酶，可以將淀粉分解為葡葡糖。黑曲霉為需氧型嗜溫微生物，因此利用黑曲霉使米飯中淀粉糖化所需的發(fā)酵條件是有氧和較高溫度。

（3）尿素固體培養(yǎng)基可用于分離產(chǎn)脲酶的細(xì)菌，他們可以通過降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源，尿素分解為氨后被細(xì)菌吸收可用于合成含氮的有機(jī)物如蛋白質(zhì)、核酸。

（4）以稀釋的果酒為原料發(fā)酵制作果醋，果醋中醋酸濃度一般不超過5%。其主要原因是當(dāng)發(fā)酵液中的醋酸濃度接近5%時(shí)乙醇消耗完畢，不能繼續(xù)生成醋酸。果醋發(fā)酵完畢后可以在發(fā)酵液中加入一定濃度的食鹽并密封，醋酸桿菌為好氧菌，在高鹽濃度且缺氧條件下能夠抑制醋酸桿菌生長(zhǎng)，以免醋酸進(jìn)一步氧化分解。

（二）（1）質(zhì)粒具有能自主復(fù)制且在細(xì)菌中穩(wěn)定存在的特點(diǎn)，常作為基因工程的載體。

（2）用兩種不同的限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因，再用這兩種酶切割農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，使切割后目的基因兩端產(chǎn)生的粘性末端不同，Ti質(zhì)粒兩端的粘性末端也不同，可以防止切割后的目的基因或質(zhì)粒自身環(huán)化，從而提高目的基因和質(zhì)粒重組的成功率。用DNA連接酶連接目的基因和Ti質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低溫度，原因是溫度較低有利于粘性末端之間形成氫鍵，使不同DNA分子片段更容易連接在一起。

（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入植物細(xì)胞，可取植物葉片經(jīng)消毒后，剪成小片作為轉(zhuǎn)基因的受體材料。之所以不用完整的葉片，一方面是由傷口有利于農(nóng)桿菌侵染植物組織，再者傷口也有利于組織培養(yǎng)時(shí)愈傷組織的形成。

（4）抗鹽品種的培養(yǎng)不一定需要基因工程技術(shù)，也可利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，在培養(yǎng)基中加入不同濃度的NaCl，誘發(fā)和篩選抗鹽突變體。