Question

【題目】胚胎干細胞（ES細胞）介導法是轉基因動物培育的途徑之一，請據(jù)下圖綠色熒光蛋白老鼠的培育流程回答相關問題：

（1）胚胎干細胞是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細胞，在形態(tài)上，表現(xiàn)為_________，在體外培養(yǎng)的條件下具有__________的特點。

（2）基因表達載體的構建是基因工程的核心步驟，此過程中常用到的酶是__________。將修飾后的綠色熒光蛋白基因導人ES細胞常采用的方法是__________；培養(yǎng)過程中，ES細胞所需的氣體主要有02和C02，其中02是__________，C02用來維持培養(yǎng)液的pH值。

（3）為檢測ES細胞的染色體上是否含有綠色熒光蛋白基因，在分子水平上可采用的方法是__________；圖中④過程中要將含外源基因的ES細胞導人囊胚的__________。將得到的重組胚胎導入⑤體內(nèi)，其存活的基礎是__________。

Answer 1

【答案】細胞體積小、細胞核大、核仁明顯 可以增殖而不發(fā)生分化 限制酶和DNA連接酶 顯微注射法（技術） 細胞代謝必需的 DNA分子雜交 內(nèi)細胞團 受體子宮對外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應

【解析】

基因工程技術的基本步驟：目的基因的獲取→基因表達載體的構建（核心）→將目的基因導入受體細胞（將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法）→目的基因的檢測與鑒定（包括分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術；個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等）。

動物細胞培養(yǎng)的條件：無菌、無毒的環(huán)境；一定的營養(yǎng)物質(zhì)；溫度和PH；氣體環(huán)境：即95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的PH）。

胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細胞團）．胚胎干細胞具有胚胎細胞的特性，體積較小，細胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動物任何一種組織細胞．另一方面，在體外培養(yǎng)條件下，ES細胞可不斷增殖而不發(fā)生分化，可進行冷凍保存，也可以進行某些遺傳改造。

（1）胚胎干細胞（ES細胞）是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細胞，在形態(tài)上，表現(xiàn)為細胞體積小、細胞核大、核仁明顯；在功能上具有發(fā)育的全能性。在體外培養(yǎng)的條件下具有可以增殖而不發(fā)生分化的特點。

（2）基因表達載體的構建是基因工程的核心，常常用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶。將修飾后的目的基因（綠色熒光蛋白基因）導入動物受體細胞（ES細胞）常采用的方法是顯微注射法；動物細胞培養(yǎng)時，需要一定的氣體環(huán)境（95%的空氣和5%的CO2），其中氧氣是細胞代謝所必須的，CO2是維持培養(yǎng)液的pH。

（3）為檢測ES細胞的染色體上是否含有綠色熒光蛋白基因，在分子水平上可采用的方法是DNA分子雜交法；圖中④過程中要將含外源基因的ES細胞導入囊胚的內(nèi)細胞團，因為只有內(nèi)細胞團的細胞才發(fā)育為后代的組織器官。將得到的重組胚胎導入⑤的子宮內(nèi)，其存活的基礎是受體子宮對外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應。