Question

9．分離篩選降解纖維素能力強(qiáng)的微生物對(duì)于解決秸稈等廢棄物資源的再利用和環(huán)境污染問題具有理論和實(shí)際意義．研究人員從土壤和腐爛的秸稈中分離篩選出能高效降解纖維素的菌株，并對(duì)篩選出的菌株進(jìn)行了初步研究．
（1）對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌．為在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落，若以接種環(huán)為工具，則用平板劃線法進(jìn)行接種．
（2）先將樣品懸液稀釋后涂在放有濾紙條的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選得到初篩菌株．再將初篩菌株接種到以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)2～5天，加入剛果紅溶液后，依據(jù)出現(xiàn)的顏色反應(yīng)進(jìn)行篩選，觀察菌落特征并測(cè)量透明圈直徑與菌落直徑．同時(shí)將初篩菌株制備成的菌液放入加有濾紙條的液體培養(yǎng)基中，恒溫振蕩培養(yǎng)8天，觀察濾紙條的破損情況．結(jié)果見表．由表可知，8種菌株中1、3、7號(hào)菌株產(chǎn)酶能力較強(qiáng)，原因是此三種菌株透明圈直徑與菌落直徑的比都較高，且濾紙片破損程度高．

菌株編號(hào) 檢測(cè)指標(biāo)	1號(hào)	2號(hào)	3號(hào)	4號(hào)	5號(hào)	6號(hào)	7號(hào)	8號(hào)
DP	5.91	1.73	6.54	1.53	3.23	1.76	7.29	1.34
濾紙破損	+++++	+++	+++++	++	++++	+++	+++++	++

注：①D_P=（D/d）²，其中d表示菌落直徑（cm），D表示水解圈直徑（cm）
②“+”為濾紙邊緣膨脹，“++”為濾紙整齊膨脹并彎曲，“+++”為濾紙不定形“++++”為成團(tuán)糊狀“+++++”為半清狀
（3）為進(jìn)一步研究1、3、7號(hào)菌株對(duì)秸稈降解的效果．分別用這三種菌株對(duì)秸稈進(jìn)行處理，并在第5天和第10天對(duì)秸稈和秸稈中含有的纖維素、半纖維素以及木質(zhì)素等組分的降解情況進(jìn)行了測(cè)定．結(jié)果見圖．

由圖分析可知，三種菌株對(duì)的半纖維素降解最強(qiáng)，與第5天結(jié)果相比，第10天秸稈各組分中纖維素的降解率變化最大．整體分析號(hào)菌株7的降解效果最好．

Answer 1

分析 1、從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．篩選纖維素分解菌需要使用一纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基．剛果紅和纖維素結(jié)合能形成紅色復(fù)合物，纖維素分解菌可以產(chǎn)生纖維素酶而分解纖維素使菌落周圍出現(xiàn)透明圈，所以可以用剛果紅鑒別纖維素分解菌．酵母菌無氧發(fā)酵產(chǎn)生的酒精可以用酸性的重鉻酸鉀檢驗(yàn)，呈灰綠色．
2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．

解答 解：（1）對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌．平板劃線法中利用接種環(huán)或接種針，稀釋涂布平板法利用涂布器涂布稀釋液．
（2）分離篩選出能高效降解纖維素的菌株時(shí)，培養(yǎng)基中應(yīng)以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基；鑒別纖維素分解菌時(shí)需要加入剛果紅染液，當(dāng)形成菌落以后可以根據(jù)菌落周圍是否產(chǎn)生透明圈來實(shí)現(xiàn)纖維素分解菌．
由表可知，8種菌株中1、3、7號(hào)三種菌株透明圈直徑與菌落直徑的比都較高，且濾紙片破損程度高，表明這些菌株產(chǎn)酶能力較強(qiáng)．
（3）分析柱形圖可知，三種菌株對(duì)半纖維素的降解最強(qiáng)；與第5天結(jié)果相比，第10天秸稈各組分中纖維素的降解率變化最大．整體分析，7號(hào)菌株的秸稈、纖維素、半纖維素以及木質(zhì)素的分解量均很高，即降解效果最好．
故答案為：
（1）高壓蒸汽滅菌        平板劃線
（2   纖維素 剛果紅     透明圈直徑與菌落直徑      此三種菌株透明圈直徑與菌落直徑的比都較高，且濾紙片破損程度高
（3）半纖維素    纖維素    7

點(diǎn)評(píng) 本題考查了土壤中纖維素分解菌分離和培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記微生物培養(yǎng)過程中滅菌的方法以及微生物分離與純化的接種方法，能夠區(qū)分兩種接種方法的接種工具的區(qū)別，能夠結(jié)合表格和柱形圖獲取解題的關(guān)鍵信息．