Question

【題目】近年來，化肥對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的負(fù)面影響及對(duì)環(huán)境的污染日益引起人們的關(guān)注。由于固氮菌能固定大氣中的氮?dú)�，提高土壤的氮含量，從而分離得到自生固氮菌（不與植物形成共生體）用以對(duì)土壤進(jìn)行接種已成為一個(gè)新的研究方向。下表是微生物培養(yǎng)時(shí)常用的兩種培養(yǎng)基，回答下列問題

培養(yǎng)基甲	馬鈴薯	葡萄糖					瓊脂	蒸餾水	pH
	200 g	20 g					15~20 g	1000mL	自然
培養(yǎng)基乙	甘露醇(或蔗糖、葡萄糖)	KH2PO4	MgSO4·7H2O	NaCl	CaSO4·H2O	CaCO3	瓊脂	水	pH
	10 g	0．2 g	0．2 g	0．2 g	0．1 g	5g	20 g	1000mL	自然

（1）分離固氮菌選用_________（填甲或乙）培養(yǎng)基。從土壤深度看，選_________（填表層或深層）的土壤容易得到自生固氮菌的菌種，獲得的土樣用_________溶解后備用。

（2）接種前，將滅過菌的培養(yǎng)基放在37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24h，目的是_________。

（3）用接種環(huán)蘸取少許稀泥漿，在培養(yǎng)基表面輕點(diǎn)15-20處，此操作過程中需對(duì)接種環(huán)進(jìn)行_______次灼燒滅菌。接好種的培養(yǎng)皿要在_________處寫明實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、接種人和日期。培養(yǎng)3-4天后可在接種的稀泥漿周圍看到黏膜液狀培養(yǎng)物，這是含有自生固氮菌的標(biāo)志。

（4）某特定染液能使自生固氮菌著色，挑取黏液，用該染液染色后制成涂片，制成的涂片在_________（填低倍或高倍）顯微鏡下觀察固氮菌的形態(tài)特征。篩選到的菌落需進(jìn)一步分離純化，純化自生固氮菌的培養(yǎng)接種方法最常用的兩種是__________________

Answer 1

【答案】乙 表層 無菌水 檢驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌是否合格 兩 皿底 高倍 稀釋涂布平板法、平板劃線法

【解析】

該題主要考察了微生物的培養(yǎng)，在制備培養(yǎng)基的時(shí)候，需要為微生物提供的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要有四類，分別為碳源、氮源、水和無機(jī)鹽。自身固氮菌屬于自養(yǎng)型生物，所以可以利用空氣中的二氧化碳和氮?dú)庾鳛樘荚春偷�源�?/span>

（1）乙培養(yǎng)基中無氮源，而甲培養(yǎng)基的馬鈴薯中含有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽等多種成分，分離固氮菌要用無氮培養(yǎng)基，因此，乙培養(yǎng)基更適合；自生固氮菌的氮源來自空氣，又是需氧型細(xì)菌，因此，在表層土壤中容易獲得該菌；為了避免雜菌污染，獲得的土壤要用無菌水溶解；

（2）培養(yǎng)基滅菌是否合格可通過將未接種的培養(yǎng)基在適合的條件下先行培養(yǎng)來檢驗(yàn)；

（3）為了減少外來雜菌污染，在接種環(huán)蘸取泥漿前要進(jìn)行灼燒滅菌，為了避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者，輕點(diǎn)稀泥漿結(jié)束后，還要進(jìn)行灼燒滅菌；因?yàn)樵诤銣叵渲幸�倒置培養(yǎng)，因此，要在皿底處寫明實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、接種人和日期；

（4）挑取黏液用特定染液染色后再制成涂片，著色的為自生固氮菌，可在高倍顯微鏡下看清固氮菌的形態(tài)特征；微生物的接種方法中最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。