Question

【題目】神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的新型受體，通過(guò)參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)促進(jìn)腫瘤血管的生成。本研究將為 NRP-1 單克隆抗體靶向治療乳腺癌提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

（1）取乳腺癌（MCF7）組織塊，運(yùn)用____________技術(shù)獲得 MCF7 細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 給小鼠注射重組的人____________蛋白后，將小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)的B細(xì)胞與__________融合，制備雜交瘤細(xì)胞。將雜交瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)， 吸取培養(yǎng)孔中的__________（填“上清液”或“沉淀細(xì)胞”），應(yīng)用____________技術(shù)進(jìn)行抗體陽(yáng)性檢測(cè)。經(jīng)多次篩選和細(xì)胞培養(yǎng)，獲得 NRP-1 單克隆抗體（NRP-1 Mab）。

（2）提取正常組織細(xì)胞和MCF7細(xì)胞的總蛋白，設(shè)置空白對(duì)照，加入NRP-1 Mab進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡（將電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上，然后用特異性抗體檢測(cè)抗原的技術(shù)），實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明了____________________________________。

（3）將MCF7細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，等量注入4組裸鼠右前腋下，接種后3天開(kāi)始給藥，共給藥7次。每隔5天測(cè)算一次腫瘤的腫瘤體積，如下圖所示。

對(duì)照組注射________，從上圖中可以看出________________________。

（4）結(jié)合題干信息，綜合以上研究請(qǐng)你推測(cè)NRP-1 Mab抑制腫瘤的作用機(jī)理是________。

Answer 1

【答案】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1） 骨髓瘤細(xì)胞 上清液 抗原—抗體雜交技術(shù) NRP-1在MMCF7細(xì)胞中高表達(dá) 等量的生理鹽水 NRP-1 Mab能夠有效地降低腫瘤的體積，中、高濃度抗體的降低效果比低濃度的效果更顯著。 NRP-1在MMCF7細(xì)胞中高表達(dá)，NRP-1 Mab與NRP-1 特異性結(jié)合，阻斷了血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與NRP-1 的結(jié)合，抑制了腫瘤血管生成，進(jìn)而降低了腫瘤的體積。

【解析】

動(dòng)物細(xì)胞融合，又稱(chēng)細(xì)胞雜交，指將兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程，融合后形成具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱(chēng)為雜交細(xì)胞。

單克隆抗體制備的過(guò)程中需要經(jīng)過(guò)兩次篩選，第一次用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；第二次用專(zhuān)一抗體檢測(cè)篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。

（1）取乳腺癌（MCF7）組織塊，需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶進(jìn)行分散處理后，運(yùn)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得MCF7細(xì)胞。要制備NRP-1單克隆抗體，需要用重組的人NRP-1蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行注射，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的漿細(xì)胞，讓該漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合處理，制備雜交瘤細(xì)胞。將雜交瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，可以從培養(yǎng)液即上清液中提取到單克隆抗體，可以用抗原——抗體雜交技術(shù)進(jìn)行抗體陽(yáng)性檢測(cè)。經(jīng)多次篩選和細(xì)胞培養(yǎng)，獲得NRP-1單克隆抗體（NRP-1 Mab）。

（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，只有MCF7細(xì)胞中蛋白可以與NRP-1 Mab發(fā)生免疫反應(yīng)，說(shuō)明NRP-1在MCF7細(xì)胞中高表達(dá)。

（3）實(shí)驗(yàn)的自變量是給藥的劑量和時(shí)間，因變量是腫瘤的體積，對(duì)照組應(yīng)該注射等量的生理鹽水，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，NRP-1 Mab能夠有效地降低腫瘤的體積，中、高濃度抗體的降低效果比低濃度的效果更顯著。

（4）根據(jù)“神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的新型受體，通過(guò)參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)促進(jìn)腫瘤血管的生成”及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)NRP-1Mab能夠有效地降低腫瘤的體積可知，NRP-1在MCF7細(xì)胞中高表達(dá)，NRP-1Mab與NRP-1特異性結(jié)合，阻斷了血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與NRP-1的結(jié)合，抑制了腫瘤血管生成，進(jìn)而降低了腫瘤的體積。