Question

【題目】下圖是制備抗埃博拉病毒VP40蛋白的單克隆抗體的過程：

（1）若要體外獲得大量的VP40基因，可采用_______技術(shù)進行擴增，若該目的基因循環(huán)擴增3次，理論上需要消耗_______個引物。

（2）過程①中除選用EcoRⅠ和XhoⅠ兩種限制酶外，還要用到________酶。

（3）過程②中VP40基因進入大腸桿菌后維持穩(wěn)定并表達的過程稱為____________，大腸桿菌等原核生物常作為受體細胞的原因 ______________________________（寫出兩點）。

（4）與植物原生質(zhì)體融合相比，過程④特有的誘導融合的方法是用____________處理。通常在選擇培養(yǎng)基中需加入__________，目的是防止培養(yǎng)過程中的污染。對雜交瘤細胞還需要進行克隆化培養(yǎng)和_______________，最終獲得單克隆抗體。

Answer 1

【答案】PCR 14 DNA連接 轉(zhuǎn)化 繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少等 滅活的病毒 抗生素 抗體檢測

【解析】

本題以圖文結(jié)合的形式，綜合考查學生對基因工程的基本操作程序、動物細胞融合技術(shù)、生產(chǎn)單克隆抗體等相關(guān)知識的識記和理解能力，以及識圖分析能力。

(1) VP40基因為目的基因，可采用PCR技術(shù)對其進行擴增。PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復制的原理，若該目的基因循環(huán)擴增3次，則共形成23＝8個目的基因，除了最初親代目的基因的兩條模板鏈不含引物外，凡是新形成的子鏈均含有引物，因此理論上需要消耗2×8－2＝14個引物。

(2) 過程①為基因表達載體的構(gòu)建，除選用EcoRⅠ和XhoⅠ兩種限制酶切割含有VP40基因的DNA片段和質(zhì)粒外，還要用到DNA連接酶將切割后獲得的VP40基因和質(zhì)粒連接。

(3) 過程②為將構(gòu)建的基因表達載體導入受體細胞（大腸桿菌細胞）中，VP40基因進入大腸桿菌后維持穩(wěn)定并表達的過程稱為轉(zhuǎn)化。由于大腸桿菌等原核生物具有繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少等特點，因此在基因工程中常作為受體細胞。

(4) 過程④為誘導動物細胞融合。與植物原生質(zhì)體融合相比，過程④特有的誘導融合的方法是用滅活的病毒處理。通常在選擇培養(yǎng)基中加入抗生素的目的是防止培養(yǎng)過程中的污染。在單克隆抗體生產(chǎn)的過程中，對雜交瘤細胞還需要進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，以篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞，才能最終獲得單克隆抗體。