Question

【題目】“分離”作為一種傳統(tǒng)生物技術(shù)，在生產(chǎn)實(shí)踐中具有廣泛的用途。請(qǐng)回答下列有關(guān)微生物的分離純化和血紅蛋白分離的問(wèn)題：

（1）微生物分離實(shí)驗(yàn)中常用的接種工具有______________________；分離純化微生物的方法有很多，最常用的是平板劃線法和______________________；平板劃線法是通過(guò)_____________________，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物的分離。

（2）已知一種有機(jī)物ⅹ（僅含有C、H兩種元素）不易降解，會(huì)造成環(huán)境污染。要從土壤中篩選出能高效降解有機(jī)物X的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)以___________作為唯一碳源，因此這類培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基；在接種前，通常要隨機(jī)選取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是_________。

（3）分離不同種類的蛋白質(zhì)常用凝膠色譜法，該方法是根據(jù)___________對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，利用血紅蛋白作為分離樣品的優(yōu)點(diǎn)有______________________。

Answer 1

【答案】接種環(huán)（針）、涂布器 稀釋涂布平板法 接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面的連續(xù)劃線 有機(jī)物X 選擇 檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 相對(duì)分子質(zhì)量的大小 能清晰觀察到紅色的區(qū)帶在洗脫過(guò)程中的移動(dòng)情況

【解析】

1、微生物常見的接種的方法

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

2、凝膠色譜法的原理：凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來(lái)分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快，因此相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離。

（1）微生物接種和分離純化的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，使用的接種工具分別是接種環(huán)（針）和涂布器。平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)（針）在固體培養(yǎng)基表面的連續(xù)劃線，使聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物的分離。

（2）要篩選能降解有機(jī)物X的細(xì)菌，應(yīng)該以有機(jī)物X作為唯一的碳源，只能分解有機(jī)物X的細(xì)菌才能生長(zhǎng)，其他不能利用有機(jī)物X的細(xì)菌不能生長(zhǎng)，這種類型的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間，用于檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。

（3）凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)。由于血紅蛋白有顏色，利用血紅蛋白作為分離樣品能清晰觀察到紅色的區(qū)帶在洗脫過(guò)程中的移動(dòng)情況。