Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）某些土壤細菌可將尿素分解，供植物利用，回答與微生物培養(yǎng)有關(guān)的問題：

（1） 用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基添加______作為凝固劑，培養(yǎng)基中K2HP04的作用是 ______（答出兩點）。

（2）因尿素加熱會分解，因此使用G6玻璃砂漏斗進行過濾，漏斗在使用后需用________________浸泡，抽濾去除后再用蒸憾水洗至洗岀液為中性，干燥后保存。其他物質(zhì)及器材在使用高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌時，下面操作正確的是______________（ A滅菌鍋內(nèi)放入的物品應(yīng)盡量排滿實 B. LB培養(yǎng)基可分裝至培養(yǎng)血中進行滅菌 C.移液管滅菌前應(yīng)在其上端用鑷子子放入少量脫脂棉 D.三角刮刀、接種環(huán)、G6玻璃砂漏斗皆可進行高壓蒸汽滅菌）

（3）能分解尿素的細菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是________________。但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內(nèi)的葡萄癇除了可為細胞生命活動提供能量，還可以______________。在4個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋度為10-5的土壤稀釋液0.1ml，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、178和191，則土壤稀釋液中的細菌密度為_________________。

（二）單克隆抗體應(yīng)用比較廣泛，經(jīng)抗原免疫的小鼠脾細胞和骨髓瘤細胞融合后制備的鼠源單抗，會引起人體的不良反應(yīng)。科學家通過對鼠和人控制抗體合成的基因進行拼接，實現(xiàn)了對鼠源單抗的改造。下圖表示形成鼠-人嵌合抗體的過程。請據(jù)圖回答：

（1）制備鼠源單抗時，需每隔2周用抗原注射小鼠一次，共注射三次，其目的是產(chǎn)生更多的_______________ 。需要將雜交瘤細胞接種到多孔培養(yǎng)板上，進行抗體陽性檢測，之后稀釋、培養(yǎng)、再檢測，并多次重復(fù)上述操作，其目的是篩選______的雜交瘤細胞。雜交細胞培養(yǎng)過程中，為防止有害代謝物的積累，可采用______的方法。

（2）構(gòu)建人鼠嵌合抗體基因時，需從小鼠雜交瘤細胞____________篩選序列未知的可變區(qū)基因，再釣取人抗體恒定區(qū)基因，然后利用__________酶將兩者拼接。

（3）嵌合抗體作為一種較為成熟的慕因工程抗體，其__________性和親和力依賴于能否準確獲取可變區(qū)基因，而其表達水平主要取決于表達載體和宿主細胞。下列表達系統(tǒng)不屬于嵌合抗體宿主細胞的最佳選擇的是__________。（A.大腸桿菌 B. HeLa細胞C.小鼠骨髓瘤細胞 D.小鼠成纖維細胞）

Answer 1

【答案】瓊脂糖 提供無機營養(yǎng)、保持pH穩(wěn)定 HC1 D 分解尿素的細菌是異養(yǎng)生物 提供原料（或碳骨架） 1.75×108個/ml 效應(yīng)B細胞（漿細胞或淋巴細胞） 能產(chǎn)生特定抗體 更換培養(yǎng)液 基因文庫 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶 特異 A

【解析】

培養(yǎng)基的成分：水、碳源、氮源、無機鹽、生長因子等。

篩選分解尿素的微生物應(yīng)該用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行篩選。

常用的滅菌方法：干熱滅菌法、灼燒滅菌法、高壓蒸汽滅菌法等。

基因工程的工具：限制酶、DNA連接酶和運載體。

單克隆抗體制備的過程中，需要經(jīng)過瘤細胞和漿細胞的融合，該過程需要經(jīng)過選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞和專一抗體檢測篩選出能分泌專一抗體的雜交瘤細胞，最后經(jīng)過體內(nèi)或體外動物細胞培養(yǎng)，可以獲得大量的雜交瘤細胞和單克隆抗體。

（一）（1）培養(yǎng)基中常加入瓊脂糖作為凝固劑制作固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中K2HPO4可以提供無機營養(yǎng)、保持pH穩(wěn)定。

（2）因尿素加熱會分解，因此使用G6玻璃砂漏斗進行過濾，漏斗在使用后需用HC1浸泡，抽濾去除去酸，再用蒸餾水洗至洗岀液為中性，干燥后保存。其他物質(zhì)及器材在使用高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌時，

A、待滅菌的物質(zhì)放置不宜過緊，A錯誤；

B、LB培養(yǎng)基應(yīng)該先滅菌，再在超凈工作臺上分裝到培養(yǎng)皿中，B錯誤；

C、脫脂棉吸水后容易引起污染，故不能用脫脂棉，C錯誤；

D、三角刮刀、接種環(huán)、G6玻璃砂漏斗皆可進行高壓蒸汽滅菌，D正確。

故選D。

（3）能分解尿素的細菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2作為碳源，需要利用有機物如葡萄糖作為碳源。葡萄糖可為細胞生命活動提供能量，還可以為其他物質(zhì)的合成提供原料。在4個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋度為105的土壤稀釋液0.1ml，培養(yǎng)一段時間后，平板上長岀的細菌菌落數(shù)分別為13、156、178和191，進行計數(shù)時應(yīng)該選擇數(shù)目在30-300之間的菌落，故土壤稀釋液中的細菌密度為：（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108個/ml。

（二）（1）制備鼠源單抗時，三次注射抗原是為了產(chǎn)生更多的漿細胞。把雜交瘤細胞接種到多孔培養(yǎng)板上，進行抗體陽性檢測，是為了篩選能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞，篩選出的雜交瘤細胞可以進行體內(nèi)或體外培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)過程中，可以通過更換培養(yǎng)液來防止有害代謝物的積累。

（2）嵌合抗體是由鼠抗體的可變區(qū)和人抗體的恒定區(qū)重組而成，故構(gòu)建人鼠嵌合抗體基因時，可以從小鼠雜交瘤細胞基因文庫篩選序列未知的可變區(qū)基因，再釣取人抗體恒定區(qū)基因，利用限制酶和DNA連接酶將兩者拼接重組，將鼠源抗體改造成鼠-人嵌合抗體基因。

（3）嵌合抗體的特異性和親和力依賴于能否準確獲取可變區(qū)基因，而其表達水平主要取決于表達載體和宿主細胞。嵌合抗體在核糖體合成，需要經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工，故可以選擇HeLa細胞、小鼠骨髓瘤細胞、小鼠成纖維細胞等真核細胞作為受體細胞，大腸桿菌是原核細胞，不含有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，不能對抗體進行加工，不適宜作為嵌合抗體宿主細胞的最佳選擇。故選A。