Question

【題目】胰島素樣生長(zhǎng)因子－Ⅰ（IGF-Ⅰ）是一種活性蛋白多肽物質(zhì)，它是人體內(nèi)肝細(xì)胞、腎細(xì)胞、脾細(xì)胞等十幾種細(xì)胞分泌的產(chǎn)物。某研究小組利用原核細(xì)胞表達(dá)、純化IGF-Ⅰ，并制備其單克隆抗體。回答下列問(wèn)題：

（1）以人的肝組織中的總RNA處理得到的_______為模板，加入針對(duì)IGF-Ⅰ的特異引物（如下圖所示）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，提取目的基因。正向引物中含有NdeⅠ酶的識(shí)別序列，逆向引物含有BamHⅠ酶的識(shí)別序列。已知NdeⅠ酶和BamHⅠ酶的識(shí)別序列均為6個(gè)核苷酸，則NdeⅠ酶和BamHⅠ酶的識(shí)別序列分別是________和_________。

正向引物為：5’-CGCATATGATGCACACCATGTCCTCCTC-3’

逆向引物為：5’-CGGGATCCCTACTTGCGTTCTTCAAATG-3’

（2）使用PCR擴(kuò)增的目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體，并用該表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，通過(guò)純化獲取足量的IGF-Ⅰ。選擇大腸桿菌作為受體細(xì)胞的原因是_____________。

（3）用IGF-Ⅰ處理免疫小鼠，一段時(shí)間后，處死免疫小鼠，采集血清備用。取小鼠脾細(xì)胞與_______細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合得到多種雜種細(xì)胞。除對(duì)這些雜種細(xì)胞進(jìn)行選擇培養(yǎng)外，還需進(jìn)行專一抗體檢驗(yàn)。檢驗(yàn)雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液時(shí)，需要進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)：以檢驗(yàn)__________作為陽(yáng)性對(duì)照，以檢驗(yàn)_______________和_____________作為陰性對(duì)照。

Answer 1

【答案】 cDNA -CATATG- -GGATCC- 單細(xì)胞、繁殖快、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少 骨髓瘤 免疫小鼠的血清 未免疫小鼠的血清 骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液

【解析】【試題分析】

本題主要考查基因工程和制備單克隆抗體的相關(guān)知識(shí)。需要先梳理相關(guān)知識(shí)，再結(jié)合題意進(jìn)行分析作答。限制酶所識(shí)別的序列，無(wú)論是6個(gè)堿基還是4個(gè)堿基，都可以找到一個(gè)中心軸線，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的，即呈回文序列。在制備單克隆抗體過(guò)程中，一般有兩次篩選過(guò)程，第一次是用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次是通過(guò)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)進(jìn)一步篩選出能產(chǎn)生人們所需要抗體的雜交瘤細(xì)胞。據(jù)此答題。

（1）IGF-Ⅰ是人體內(nèi)肝細(xì)胞、腎細(xì)胞、脾細(xì)胞等十幾種細(xì)胞分泌的產(chǎn)物，所以可以從人的肝組織中的獲取總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，再以該cDNA為模板，加入針對(duì)IGF-Ⅰ的特異引物（如下圖所示）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，提取目的基因；限制性內(nèi)切酶識(shí)別DNA序列中的回文序列，據(jù)此可推知NdeⅠ酶的識(shí)別序列是-CATATG-，BamHⅠ酶的識(shí)別序列是-GGATCC-。

（2）大腸桿菌屬于原核生物，單細(xì)胞、繁殖快、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少，因此常被用作基因工程的受體細(xì)胞。

（3）制備單克隆抗體時(shí)，首先取已免疫的小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合得到多種雜種細(xì)胞，然后對(duì)這些雜種細(xì)胞進(jìn)行選擇培養(yǎng)，并且進(jìn)行專一抗體檢驗(yàn)；檢驗(yàn)雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液時(shí)，需要進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)：以檢驗(yàn)免疫小鼠的血清作為陽(yáng)性對(duì)照，以檢驗(yàn)未免疫小鼠的血清和骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液作為陰性對(duì)照。