Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種。請(qǐng)回答問(wèn)題：

（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計(jì)引物，采用PCR技術(shù)從陸地棉基因文庫(kù)中獲取酶D基因，從擬南芥基因中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因，所含限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ)的酶切位點(diǎn)如圖甲所示。

若用_______和_______酶處理酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因后，可得到____端與________端(填圖中字母)相連的重組基因。

（2）將上述重組基因進(jìn)一步處理，插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建____________并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含________的固體平板上培養(yǎng)得到含重組基因的單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是_________，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞，該細(xì)胞通過(guò)_______技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。

Answer 1

【答案】 ClaⅠ DNA連接 A D 基因表達(dá)載體(或“重組質(zhì)粒”) 四環(huán)素 利用農(nóng)桿菌將重組基因?qū)�入油菜�?xì)胞 植物組織培養(yǎng)

【解析】試題分析：本題考查基因工程、細(xì)胞工程，考查對(duì)基因工程工具、操作程序的理解和記憶。解答此題，可根據(jù)酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因所含限制酶的酶切位點(diǎn)選擇限制酶以產(chǎn)生相同的粘性末端，根據(jù)Ti質(zhì)粒上的標(biāo)記基因篩選含重組基因的農(nóng)桿菌菌落。

（1）據(jù)圖甲可知，酶D基因的A端和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因的D端有共同的限制酶ClaⅠ的切點(diǎn)，用ClaⅠ和DNA連接酶處理酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因，可得到A端與D端相連的重組基因。

（2）將重組基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，即可得到基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒）。Ti質(zhì)粒中的四環(huán)素抗性基因可作為標(biāo)記基因，將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)，可得到含重組基因的單菌落。

（3）剪取油菜的葉片放入含有農(nóng)桿菌的侵染液中一段時(shí)間，利用農(nóng)桿菌能感染雙子葉植物細(xì)胞的特性，將重組基因?qū)�入油菜�?xì)胞。根據(jù)細(xì)胞的全能性，轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞可通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)，培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。