Question

（09湛江市一模）(生物技術(shù)實(shí)踐  10分)   

生物乙醇是以生物為原料生產(chǎn)的可再生能源。我國利用農(nóng)作物廢棄物(秸稈)生產(chǎn)乙醇，其技術(shù)流程為：

纖維素酶解  酵母發(fā)酵  蒸餾  成品。

（1）纖維素酶的成本能否下降，是能否實(shí)現(xiàn)乙醇工業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵因素。纖維素酶可以從能分解纖維素的細(xì)菌培養(yǎng)液中提取。某同學(xué)設(shè)計(jì)了如下分離土壤中纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣--選擇培養(yǎng)--梯度稀釋--鑒別培養(yǎng)。

①最好選擇怎樣的環(huán)境采集土樣？

②以下是一種培養(yǎng)基配方：纖維素粉5g、NaN0₃ 1g、Na₂HP0₄?7H₂0  1．2g、KH₂P0₄O．9g、 MgS0₄?7H₂0 O．5g、  KCl 0．5g、酵母膏0．5g、水解酵素0．5g(蒸餾水定容到1．000mL)。

該培養(yǎng)基能夠增加樣品中纖維素分解菌的濃度，其原理是             。

③為了鑒別纖維素分解菌和進(jìn)一步純化菌種，可以在鑒別培養(yǎng)基中加入      染液，將篩選獲得的菌液稀釋后用       法接種到鑒別培養(yǎng)基上，然后挑選產(chǎn)生          的菌落作為菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

④纖維素分解菌培養(yǎng)液中的纖維素酶產(chǎn)量如何呢？可設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測，請寫出實(shí)驗(yàn)思路：                   。  

（2）進(jìn)行工業(yè)化酶解時(shí)，為了使纖維素酶能反復(fù)使用，可以采用       技術(shù)。

（3）乙醇是酵母菌的發(fā)酵產(chǎn)物。發(fā)酵時(shí)酵母菌直接利用的物質(zhì)是        。

（4）發(fā)酵時(shí)乙醇濃度升高會對酵母菌產(chǎn)生毒性，從而影響進(jìn)一步的發(fā)酵�？茖W(xué)家利用基因工程方法創(chuàng)造出一種對乙醇濃度有高耐受力的酵母菌新菌種，該過程需采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。與體內(nèi)DNA復(fù)制相比，PCR反應(yīng)體系除需加入兩種引物外，還需加入        。  

Answer 1

答案：

（1）①選擇纖維素豐富的土壤環(huán)境

②培養(yǎng)基中纖維素是主要碳源，有利于纖維素分解菌生長，同時(shí)抑制其他微生物生長

③剛果紅     涂布平板法       透明圈

④向定量纖維素分解菌培養(yǎng)液中加入定量纖維素，定時(shí)測定葡萄糖產(chǎn)量的變化

（2）固定化酶w.w.w.k.s.5 u.c.o.m

（3）葡萄糖(或纖維素酶解產(chǎn)物)

（4）耐熱的DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)