Question

【題目】（一）回答下列有關(guān)生物技術(shù)實(shí)踐的問(wèn)題：

（1）某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基配方為：蛋白胨10克、葡萄糖5克、蔗糖5克、KH2PO4 2克、顯色劑（伊紅美藍(lán)）0. 2g、瓊脂12克，將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于_______培養(yǎng)基，若要分離能分解尿素的細(xì)菌，需對(duì)培養(yǎng)基作出的兩項(xiàng)調(diào)整是___________、___________。

（2）對(duì)同一濃度的脲酶生產(chǎn)菌稀釋液，分別用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)和稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)，若不存在實(shí)驗(yàn)誤操作，則前者的數(shù)量___________（填“多于”、“等于”或“小于”）后者，其原因是___________________。

（3）某科研工作者用特殊的化學(xué)物質(zhì)將脲酶包裹，遇水后包裹層很快溶解，釋放出來(lái)的酶迅速發(fā)揮催化作用。請(qǐng)說(shuō)明這是否運(yùn)用了酶的固定化技術(shù)及其理由：_____________________________。

（二）下圖是治療性克隆時(shí)獲取病人胚胎干細(xì)胞的過(guò)程。

（1）圖示方法一和方法二都使用了去核卵母細(xì)胞，主要是因?yàn)?/span>___________。在培養(yǎng)過(guò)程中除了添加糖、氨基酸等必要的營(yíng)養(yǎng)成分外，往往還添加動(dòng)物血清，原因是__________________________。

（2）將分離出的胚胎干細(xì)胞放入有分化誘導(dǎo)因子的培養(yǎng)液中，誘導(dǎo)其分化成所需類型細(xì)胞或器官，完成該過(guò)程的實(shí)質(zhì)是____。在單克隆抗體制備過(guò)程中，誘導(dǎo)漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，此過(guò)程需要兩次篩選，這兩次篩選出的目標(biāo)細(xì)胞分別為___；_______。

Answer 1

【答案】鑒別 將蛋白胨換為尿素， 瓊脂換成瓊脂糖 多于 前者產(chǎn)脲酶菌絲分散的或活菌和死菌一起計(jì)數(shù)，后者存在多個(gè)產(chǎn)脲酶菌形成一個(gè)菌落的情況或只計(jì)數(shù)活菌。 未運(yùn)用酶的固定化技術(shù)，因?yàn)槊肝垂潭ㄔ诓蝗苡谒�的載體上，也不能重復(fù)利用。 卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中有促進(jìn)核基因表達(dá)的物質(zhì)； 動(dòng)物血清營(yíng)養(yǎng)成分比較齊全，可以彌補(bǔ)人工培養(yǎng)基的不足。 基因的選擇性表達(dá)； 雜交瘤細(xì)胞； 能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。

【解析】

1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
2、由于細(xì)菌分解在尿素的過(guò)程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，PH升高，所以可以用檢測(cè)pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，PH升高，指示劑變紅。

（一）

（1）分析培養(yǎng)基成分可知，培養(yǎng)基中加入顯色劑，因此根據(jù)用途可以判斷，該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基；培養(yǎng)基中的氮源為蛋白胨，若要分離能分解尿素的細(xì)菌需將培養(yǎng)基中蛋白胨換成尿素，將瓊脂換成瓊脂糖。

（2）對(duì)同一濃度的脲酶生產(chǎn)菌稀釋液，分別用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)和稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)，若不存在實(shí)驗(yàn)誤操作，則前者的數(shù)多于后者，其原因是前者產(chǎn)脲酶菌絲分散的或活菌和死菌一起計(jì)數(shù)，后者存在多個(gè)產(chǎn)脲酶菌形成一個(gè)菌落的情況或只計(jì)數(shù)活菌。。

（3）某科研工作者用特殊的化學(xué)物質(zhì)將脲酶包裹，遇水后包裹層很快溶解，釋放出來(lái)的酶迅速發(fā)揮催化作用。此過(guò)程未運(yùn)用酶的固定化技術(shù)，因?yàn)槊肝垂潭ㄔ诓蝗苡谒�的載體上，也不能重復(fù)利用。

（二）

（1）方法一和方法二都使用了去核卵母細(xì)胞，主要是因?yàn)槁涯讣?xì)胞的細(xì)胞質(zhì)可以給體細(xì)胞的細(xì)胞核提供表達(dá)全能性的環(huán)境。在培養(yǎng)過(guò)程中除了添加糖、氨基酸等必要的營(yíng)養(yǎng)成分外，往往還添加動(dòng)物血清，原因是動(dòng)物血清營(yíng)養(yǎng)成分比較齊全，可以彌補(bǔ)人工培養(yǎng)基的不足。

（2）將分離出的胚胎干細(xì)胞放入有分化誘導(dǎo)因子的培養(yǎng)液中，誘導(dǎo)其分化成所需類型細(xì)胞或器官，完成該過(guò)程的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)。在單克隆抗體制備過(guò)程中，誘導(dǎo)漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，此過(guò)程需要兩次篩選，這兩次篩選出的目標(biāo)細(xì)胞分別為雜交瘤細(xì)胞和能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。