Question

【題目】草甘膦是一種非選擇性、無殘留滅生性除草劑�？茖W(xué)家從土壤農(nóng)桿菌變種CP4中分離到抗草甘膦酶的基因，并轉(zhuǎn)移到無抗草甘膦的大豆中，從而得到新的大豆品種。請(qǐng)回答：

（1）在構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)，需用同種_________酶對(duì)含編碼抗草甘膦酶基因的DNA和運(yùn)載體進(jìn)行酶切。

（2）基因表達(dá)載體除了帶有抗草甘膦酶的基因以外，還必須含有啟動(dòng)子、終止子和_________等。

（3）請(qǐng)寫出兩種檢測(cè)目的基因是否表達(dá)的方法：_________和_________。

（4）在檢測(cè)進(jìn)口大豆是否為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品時(shí)，可用核酸探針進(jìn)行檢測(cè)。核酸探針可以用_________技術(shù)進(jìn)行基因克隆，此克隆過程是利用_________的原理，利用該技術(shù)的前提是_________，需加入的酶是_________。

Answer 1

【答案】 限制性核酸內(nèi)切 標(biāo)記基因 抗原-抗體雜交法 噴施草甘膦溶液 PCR DNA復(fù)制 要有一段已知目的基因的核苷酸序列 耐高溫的DNA聚合（Taq）酶

【解析】試題分析：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，通過分析基因工程的原理、操作步驟，特別是各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)以及PCR技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，再結(jié)合題中信息能準(zhǔn)確答題。

（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA。

（2）基因表達(dá)載體的組成包括目的基因（抗草甘膦酶的基因）、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）檢測(cè)目的基因是否表達(dá)的方法：從分子水平上檢測(cè)，可采用抗原-抗體雜交法；從個(gè)體水平上鑒定，可噴施草甘膦溶液，觀察大豆的生存情況。

（4）基因克隆屬于分子水平的克隆，可采用PCR技術(shù)，其原理是DNA復(fù)制；采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列；PCR技術(shù)中有高溫變性過程，因此需加入的酶是耐高溫的DNA聚合（Taq）酶。