Question

20．如圖1是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)干擾素的簡化流程．請分析回答：

（1）過程①使用的（同一種）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）酶能使特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵（化學(xué)鍵）斷開．運(yùn)載體的黏性末端與目的基因DNA片段的黏性末端就可通過堿基互補(bǔ)原則而結(jié)合．
（2）圖1中A的名稱是重組載體（重組質(zhì)粒），它重組成功的物質(zhì)基礎(chǔ)是干擾素基因的DNA與細(xì)菌質(zhì)粒DNA的結(jié)構(gòu)組成相同．（“相同”或“不同”）
（3）A上應(yīng)有RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動干擾素基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為啟動子．為直接檢測干擾素基因是否轉(zhuǎn)錄，可從細(xì)胞中提取RNA與用放射性同位素標(biāo)記的目的基因作探針進(jìn)行分子雜交．
（4）利用PCR擴(kuò)增儀大量擴(kuò)增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根據(jù)這一序列合成引物，除了該物質(zhì)和目的基因外，擴(kuò)增儀中還需加入四種脫氧核苷酸和DNA聚合酶（Taq酶）酶，并適時調(diào)整溫度，才能使目的基因數(shù)量成指數(shù)式增長．
（5）在該工程中所用的基因“剪刀”能識別的序列和切點(diǎn)是-G′GATCC-．請畫出質(zhì)粒被切割形成黏性末端的過程圖（如圖2所示）-G′GATCC--G GATCC-
-C CTAGG--CCTAG G-．

Answer 1

分析 分析圖1：圖中①過程表示利用同一種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，以獲得相同的黏性末端；②過程表示利用DNA連接酶構(gòu)建基因表達(dá)載體；③過程表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞．

解答 解：（1）切割目的基因和質(zhì)粒需用同一種限制性核酸內(nèi)切酶．限制酶破壞脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，目的基因與質(zhì)粒的黏性末端之間通過堿基互補(bǔ)配對連接起來．
（2）由于干擾素基因的DNA與細(xì)菌質(zhì)粒DNA結(jié)構(gòu)組成相同，所以可構(gòu)建重組質(zhì)粒．
（3）驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄的結(jié)構(gòu)是啟動子．檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄，可采用分子雜交技術(shù)，即從細(xì)胞中提取RNA與用放射性同位素標(biāo)記的目的基因作探針進(jìn)行分子雜交．
（4）利用PCR擴(kuò)增儀大量擴(kuò)增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根據(jù)這一序列合成引物，除了該物質(zhì)和目的基因外，擴(kuò)增儀中還需加入四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶，并適時調(diào)整溫度，才能使目的基因數(shù)量成指數(shù)式增長．
（5）黏性末端是兩條鏈，如圖：
-G′GATCC--G     GATCC-
-C CTAGG--CCTAG     G-
故答案為：
（1）（同一種）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）  磷酸二酯鍵   堿基互補(bǔ)原則  
（2）重組載體（重組質(zhì)粒）    相同
（3）啟動子   RNA   目的基因
（4）引物    DNA聚合酶（Taq酶）
（5）-G′GATCC--G   GATCC-
-C CTAGG--CCTAG   G-

點(diǎn)評 本題結(jié)合利用利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)干擾素的簡化流程，考查基因工程的技術(shù)及原理及應(yīng)用，要求考生識記基因工程的原理及技術(shù)，能準(zhǔn)確判斷圖中各過程的名稱，能運(yùn)用所學(xué)的知識結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確判斷各題．