Question

酵母菌生長的最適宜溫度在20～30 ℃之間，能在pH為3～7.5的范圍內(nèi)生長，在氧氣充足的環(huán)境中主要以出芽生殖的方式快速增殖。大約每1.5～2小時(shí)增殖一代。某研究性學(xué)習(xí)小組據(jù)此探究酵母菌種群在不同的培養(yǎng)液濃度和溫度條件下種群密度的動(dòng)態(tài)變化，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)操作步驟如下：

第一步：配制無菌馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液和活化酵母菌液。

第二步：利用相同多套裝置，按下表步驟操作。

裝置編號	A	B	C	D
裝置容器
內(nèi)的溶液
無菌馬鈴薯葡萄糖
培養(yǎng)液/mL	10	10	5	5
無菌水/mL	－	－	5	5
活化酵母菌液/mL	0.1	0.1	0.1	0.1
溫度(℃)	5	25	5	25

 

第三步：用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)裝置中起始酵母菌數(shù)目，做好記錄。

第四步：將各裝置放在其他條件相同且適宜的條件下培養(yǎng)。

第五步：連續(xù)7天，每天隨機(jī)抽時(shí)間取樣計(jì)數(shù)，做好記錄。

回答下列問題：

(1)改正實(shí)驗(yàn)操作步驟中的一處錯(cuò)誤________________________________________________________________________。

(2)某同學(xué)第5天在使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)做法如下：

①振蕩搖勻試管，取1 mL培養(yǎng)液并適當(dāng)稀釋(稀釋樣液的無菌水中加入了幾滴臺(tái)盼藍(lán)染液)。

②先將____________放在計(jì)數(shù)室上，用吸管吸取稀釋后的培養(yǎng)液滴于其邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入，多余培養(yǎng)液________，制作好臨時(shí)裝片。

③顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)：在觀察計(jì)數(shù)時(shí)只記______(填“被”或“不被”)染成藍(lán)色的酵母菌。

(3)如所使用的血球計(jì)數(shù)板有16個(gè)中方格，每1中方格中有25個(gè)小方格，每1個(gè)小方格容積為0.1 mm2(1 mL＝1 000 mm3)。請推導(dǎo)出1毫升培養(yǎng)液中酵母菌細(xì)胞的計(jì)算公式：酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/mL＝____________。

 

Answer 1

(1)第五步中應(yīng)每天同一時(shí)間(定時(shí))取樣

(2)②蓋玻片　用濾紙(吸水紙)吸去�、鄄槐�

(3)平均每個(gè)小方格的酵母菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)

 

(1)實(shí)驗(yàn)中要注意遵循單一變量和對照原則，該實(shí)驗(yàn)中要注意在每天同一時(shí)間取樣，否則由于時(shí)間不同而影響結(jié)果準(zhǔn)確性。

(2)計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格；另一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格。但無論是哪種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格數(shù)都是相同的，即16×25＝400個(gè)小方格。每一個(gè)大方格邊長為1 mm，則每一大方格的面積為1 mm2，蓋上蓋玻片后，載玻片與蓋玻片之間的高度為0.1 mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1 mm3。在計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成1 mL菌液中的總菌數(shù)。

(3)計(jì)數(shù)時(shí)，如果使用16格×25格規(guī)格的計(jì)數(shù)室，要按對角線位，取左上、右上、左下、右下4個(gè)中格(即100個(gè)小格)的酵母菌數(shù)。如果規(guī)格為25格×16格的計(jì)數(shù)板，除了取其4個(gè)對角方位外，還需再數(shù)中央的一個(gè)中格(即80個(gè)小方格)的酵母菌數(shù)。對每個(gè)樣品計(jì)數(shù)三次，取其平均值，按下列公式計(jì)算每1毫升菌液中所含的酵母菌個(gè)數(shù)。①16倍×25倍的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：酵母細(xì)胞數(shù)/mL＝(100個(gè)小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/100)×400×104×稀釋倍數(shù)。②25倍×16倍的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：酵母細(xì)胞數(shù)/mL＝(80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/80)×400×104×稀釋倍數(shù)。