Question

華蟾素注射液是將蟾蜍的全皮陰干后，提煉而成的中藥復(fù)方制劑，是我國(guó)經(jīng)典抗腫瘤藥物。研究人員為探尋華蟾素注射液抗肝癌HepG-2細(xì)胞的作用機(jī)理，進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)根據(jù)題中信息回答下列問題。

Ⅰ.肝癌HepG-2細(xì)胞的培養(yǎng)：

（1）培養(yǎng)肝癌HepG-2細(xì)胞時(shí)，在培養(yǎng)基中加入適量的__________以補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，為防止培養(yǎng)過程發(fā)生污染要加入______。此外，每48h更換1次培養(yǎng)液，目的是__________。同時(shí)還要提供適宜的溫度、______、氧氣和二氧化碳等環(huán)境條件。

Ⅱ.探究華蟾素藥效作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)：

（2）用不同濃度的華蟾素注射液分別處理HepG-2細(xì)胞12h、24h和48h，測(cè)定華蟾素注射液對(duì)HepG-2細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果如下圖。

由圖甲可知，華蟾素能有效地______肝癌HepG-2細(xì)胞增殖，且與______呈正相關(guān)。圖乙的結(jié)果進(jìn)一步表明，華蟾素對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞增殖的影響體現(xiàn)在______________。

（3）DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（簡(jiǎn)稱TopoⅡ）為真核生物所必需，在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、重組及形成正確的染色體結(jié)構(gòu)、染色體分離、濃縮等方面發(fā)揮重要作用，TopoⅡ在腫瘤細(xì)胞中含量明顯高于正常細(xì)胞。華蟾素注射液處理HepG-2細(xì)胞48h后，采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)TopoⅡ基因的表達(dá)情況，結(jié)果如圖丙。

①RT-PCR即逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)。其主要原理是：提取HepG-2細(xì)胞中的總RNA， 以一段_______作為引物，在________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA為模板進(jìn)行_________。

②由圖丙可知，華蟾素注射液在基因水平上影響肝癌HepG-2細(xì)胞的機(jī)理是______。

Answer 1