Question

【題目】基因工程中可以通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因�；卮鹣铝袉栴}。

（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括__________________和________________。

（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是______________。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是 ____________________。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的________。

（3）目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶，而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是________________________________________________________________。

（4）______________________是實(shí)施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。

Answer 1

【答案】基因組文庫(kù) 部分基因文庫(kù) 解旋酶 加熱至90-95度 氫鍵 Taq酶熱穩(wěn)定性高，大腸桿菌的DNA聚合酶在高溫下會(huì)變性失活 基因表達(dá)載體的構(gòu)建

【解析】

基因工程的操作步驟：目的基因的獲�。ɑ�因文庫(kù)獲取、PCR、人工合成）；構(gòu)建基因表達(dá)載體（含目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)）；把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、鈣離子處理法）；目的基因的檢測(cè)和鑒定（分子水平—DNA分子雜交法、分子雜交法、抗原抗體雜交法和個(gè)體水平—抗蟲、抗病接種實(shí)驗(yàn)等）。

（1）基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)，前者包括一種生物的全部基因，后者只包括一種生物的部分基因。

（2）體內(nèi)進(jìn)行DNA復(fù)制時(shí)，需要解旋酶和DNA聚合酶，解旋酶可以打開雙鏈之間的氫鍵，DNA聚合酶可以催化磷酸二酯鍵的形成。在體外進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，利用高溫即加熱至90-95℃變性破壞雙鏈之間的氫鍵，解旋酶和高溫處理都破壞了DNA雙鏈中堿基對(duì)之間的氫鍵。

（3）由于在PCR過程中，需要不斷的改變溫度，該過程中涉及較高溫度處理變性，細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶在高溫處理下會(huì)變性失活，PCR過程中需要用耐高溫的DNA聚合酶催化。

（4）基因工程的基本原理是讓人們感興趣的基因（即目的基因）在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定高效地表達(dá)。基因表達(dá)載體的構(gòu)建是實(shí)施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。