Question

【題目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫(yī)用價值，只能從人血漿中制備。圖是以基因工程技術獲取重組HSA的兩條途徑，其中報告基因表達的產物能催化無色物質K呈現藍色。

據圖回答下列問題：

（1） 在利用PCR技術獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用____________尋找HSA基因的位置并進行擴增，PCR的原料是____________________。

（2）已知堿性磷酸酶能除去核苷酸末端的5’磷酸，構建表達載體的過程中用該酶處理Ti質粒，但HSA基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是_____________________________________，在上述條件下DNA連接酶可以使HSA基因和Ti質粒之間形成_____個磷酸二酯鍵。

（3） 過程①中需將植物細胞與農桿菌混合后共同培養(yǎng)，旨在讓______________進入植物細胞；除盡農桿菌后，還須轉接到含_____________的培養(yǎng)基上篩選出轉化的植物細胞。

（4） ③過程中將目的基因導入綿羊受體細胞，采用最多，也是最為有效的方法是______________，還可以使用__________________作為載體，實現轉化。

（5） 為檢測HSA 基因的表達情況，可提取受體細胞的 __________________，用抗血清白蛋白的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】引物 dNTP 防止Ti質粒發(fā)生自接 2 T-DNA 無色物質K 顯微注射技術 動物病毒 蛋白質

【解析】

分析題圖可知，①表示將目的基因導入植物受體細胞，常用方法有：農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；②表示將受體細胞培育成轉基因植物，需要用到植物組織培養(yǎng)技術；③⑤表示轉基因動物的培育過程，常以受精卵作為受體細胞，常采用顯微注射法。

（1）在利用PCR技術獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用引物尋找HSA基因的位置并進行擴增，PCR的原料是脫氧核糖核苷三磷酸（即dNTP）。

（2）防止Ti質粒發(fā)生自接，構建表達載體的過程中，用堿性磷酸酶處理Ti質粒，但HSA基因不用堿性磷酸酶處理；由于在上述條件下，堿性磷酸酶除去了質粒核苷酸末端的5’磷酸，所以DNA連接酶可以使HSA基因和Ti質粒之間只能形成2個磷酸二酯鍵。

（3）過程①中需將植物細胞與農桿菌混合后共同培養(yǎng)，旨在通過農桿菌的轉化作用，讓T-DNA進入植物細胞；由于報告基因表達的產物，能催化無色物質K呈現藍色，所以除盡農桿菌后，還須轉接到含無色物質K的培養(yǎng)基上篩選出轉化的植物細胞。

（4）將目的基因導入動物細胞，采用最多、也是最為有效的方法是顯微注射技術，還可以使用動物病毒作為載體，實現轉化。

（5）為檢測HSA 基因是否成功表達，可提取受體細胞的蛋白質，用抗血清白蛋白的抗體進行雜交實驗。