Question

 基因敲除是應(yīng)用DNA重組原理發(fā)展起來(lái)的一門(mén)新興技術(shù)�！盎�因敲除細(xì)胞”的構(gòu)建過(guò)程如下：

第一步：從小鼠囊胚中分離出胚胎干細(xì)胞（ES），在培養(yǎng)基中擴(kuò)增。這些細(xì)胞中需要改造的基因稱為“靶基因”。

第二步：構(gòu)建基因表達(dá)載體。取與靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂與靶基因的DNA正好配對(duì)，所以能將表達(dá)載體準(zhǔn)確地帶到靶基因的位置。

第三步：將表達(dá)載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，并與其內(nèi)靶基因同源重組，完成胚胎干細(xì)胞的基因改造。

第四步：基因改造后的胚胎干細(xì)胞增殖、篩選�；�本原理如下圖所示。

請(qǐng)根據(jù)上述資料，回答下列問(wèn)題：

（1）在把與靶基因序列同源的目的基因?qū)�入受體細(xì)胞前，應(yīng)首先完成              ，在這過(guò)程中所需要的工具酶是                              。

（2）如果要獲得一只含目的基因的小鼠，則選擇的受體細(xì)胞通常是            。若用大腸桿菌儲(chǔ)存目的基因，則需先將其處理為             細(xì)胞。

（3）上述資料中neoR基因的作用最可能是                               。

（4）（2）中獲得的小鼠，通過(guò)有性生殖產(chǎn)生的后代是否都含該目的基因？       。為什么?             。

Answer 1

（1）表達(dá)載體的構(gòu)建    限制性核酸內(nèi)切酶（答限制酶也給分）和DNA連接酶

（2）受精卵            感受態(tài)

（3）作為標(biāo)志基因，便于篩選

（4）否      在形成生殖細(xì)胞時(shí)等位基因（目的基因和靶基因）會(huì)發(fā)生分離