Question

轉基因重組酵母乙肝疫苗是一種乙肝表面抗原（HbsAg)亞單位疫苗，它采用轉基因的方法將乙肝病毒表達表面抗原的基因進行質粒構建，轉入啤酒酵母菌中，通過培養(yǎng)這種重組酵母菌來表達乙肝表面抗原亞單位。轉基因酵母的產生過程如圖所示。質粒上有SnaBⅠ、AvrⅡ、SacⅠ、BglⅡ四種限制性酶切割位點,且酶切序列如表所示。請回答：

(1)由于HBsAg基因序列已知，因此過程①可通過___________得到大量HBsAg基因，此外也可將其連接在________上，通過大腸桿菌培養(yǎng)擴增。

(2)構建含抗病基因的重組質粒時，應選用限制性核酸內切酶__________(不定項選擇）（A.SnaBⅠ B.AvrⅡ C.SacⅠ D.BglⅡ)對含HBsAg基因的DNA和質粒進行切割，切割一個含HBsAg基因的DNA分子需要消耗

_______個水分子。

(3)不同的微生物通常需要不同的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，已知釀酒酵母培養(yǎng)基配方為:酵母提取物10g，蛋白胨20g,葡萄糖20g,定容至1L，加入1.5%瓊脂粉制成固體培養(yǎng)基。則其滅菌條件應為（______）

A.高壓蒸汽滅菌法，且溫度為121℃,壓力為1kg/cm2,滅菌15分鐘

B.高壓蒸汽滅菌法，且溫度為95℃,壓力為500g/cm2，滅菌30分鐘

C.將配好的培養(yǎng)基放在超凈臺中，打開紫外燈和過濾風，滅菌30分鐘

D.在超凈臺中,打開過濾風，在酒精燈火焰旁用G6玻璃砂漏斗過濾滅菌

(4)將重組質粒導入酵母菌后，可用________法接種到固體培養(yǎng)基上。某同學在接種后得到如圖所示的菌落分布，推測該同學接種時可能的操作失誤是__________。若欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導入HBsAg基因的酵母菌,則應使重組質粒中含有_______作為標記基因，這種培養(yǎng)基屬于__________培養(yǎng)基。

(5)已知酵母菌的最適培養(yǎng)溫度是28℃，在培養(yǎng)時可將培養(yǎng)皿倒置并放入__________進行培養(yǎng)。若不倒置培養(yǎng)將導致______________________。

Answer 1