Question

【題目】回答下列（一）（二）小題：

（一）為了尋找修復(fù)多環(huán)芳烴污染后土壤的真菌品種，有關(guān)研究如下：已知某些真菌品種分泌的漆酶可以氧化多種多環(huán)芳烴有機(jī)污染物，而且可以氧化愈創(chuàng)木酚產(chǎn)生紅棕色物質(zhì)。從土壤中篩選分泌漆酶的真菌菌株流程如圖1，選擇F-5進(jìn)行多環(huán)芳烴嚴(yán)重污染土壤修復(fù)研究，共設(shè)四個(gè)處理，每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)，多環(huán)芳烴的降解情況如圖2所示。分析并回答下列問(wèn)題：

圖1 篩選分泌漆酶的高表達(dá)真菌菌株

注：AS：將5mLF-5菌株培養(yǎng)物勻漿與5g玉米粉混勻，加入土壤中

A：將5mLF-5菌株培養(yǎng)物勻漿加入土壤中

S：將5g玉米粉加入土壤中

CK：土壤中不加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和微生物勻漿

圖2多環(huán)芳烴降解情祝的柱形圖

（1）圖1將土壤懸浮液進(jìn)行梯度稀釋時(shí)應(yīng)用__________水，①②培養(yǎng)基按物理性質(zhì)分屬于__________，對(duì)接種環(huán)滅菌的方法是___________。涂布到培養(yǎng)基上的菌懸液不宜過(guò)多的原因是___________。

（2）①中挑取的單菌落應(yīng)有何特征____________________，為什么又要將菌株接種于不含愈創(chuàng)木酚的②培養(yǎng)基上培養(yǎng)______________________________。

（3）分析圖2可知：AS和A兩種處理的降解率明顯高于CK和S兩組，而AS和A之間差異不顯著，這表明土壤多環(huán)芳烴降解的主要原因是_____________________。此外推測(cè)S組的降解率顯著高于CK的原因是供試土壤為長(zhǎng)期污染的土壤，其中可能含有______________________，通過(guò)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可以在一定程度上刺激并強(qiáng)化其功能。

（二）某中國(guó)科研團(tuán)隊(duì)通過(guò)體細(xì)胞核移植成功克隆獼猴“中中”和“華華”，打破了體細(xì)胞克隆非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的理想是不可能實(shí)現(xiàn)的觀點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)流程如圖所示，分析并回答下列問(wèn)題：

（1）供體體細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，定期更換培養(yǎng)液的目是____________。由于人們對(duì)動(dòng)物細(xì)胞所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還沒(méi)有完全弄清楚，因此在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需在培養(yǎng)基中加入______________。

（2）體細(xì)胞核移植時(shí)，將甲的細(xì)胞核移植到乙的去核卵母細(xì)胞中，選擇卵母細(xì)胞的原因是_____________；圖中④表示______________技術(shù)。

（3）克隆猴“中中”和“華華”核基因組理論上與_____________（填“甲”“乙”或“丙”）猴一致，科研人員通過(guò)27個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)分析證明克隆猴核基因組信息與理論上一致，微衛(wèi)星序列是1-4個(gè)堿基的重復(fù)序列，不同個(gè)體間重復(fù)次數(shù)往往不同，說(shuō)明微衛(wèi)星位點(diǎn)_____________（填“容易”或“不容易”）發(fā)生變異，選用多個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)而非個(gè)別微衛(wèi)星位點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn)是______________；“中中”和“華華”的有些性狀與核基因組供體并不完全相同，除環(huán)境因素外，發(fā)生此現(xiàn)象的原因是___________________________。

Answer 1

【答案】無(wú)菌水 固體培養(yǎng)基 灼燒滅菌 防止菌體堆積得不到由單個(gè)真菌形成的菌落 菌落周圍有紅棕色氧化圈 確認(rèn)顏色變化是否為菌落本身的顏色而非分泌漆酶所致 接種真菌F-5 具有一定降解功能的土壤微生物 防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害 動(dòng)物血清或血漿 卵母細(xì)胞的質(zhì)中含有能使已分化的核表達(dá)出全能性的營(yíng)養(yǎng)和物質(zhì) 胚胎移植 甲 容易 減小誤差，提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性 卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響

【解析】

微生物篩選培養(yǎng)的過(guò)程：

①取樣：在微生物富集的環(huán)境中取樣，如：想培養(yǎng)分解硝基苯酚的細(xì)菌，應(yīng)在硝基苯酚含量較高的環(huán)境中進(jìn)行取樣。

②選擇培養(yǎng)：利用選擇培養(yǎng)基（含有特定氮源或碳源），保證要分離微生物生長(zhǎng)但是抑制其他微生物生長(zhǎng)。

③分離純化：可以利用稀釋涂布平板法或平板劃線法將選擇培養(yǎng)后的微生物接種培養(yǎng)，篩選鑒定，確定目標(biāo)菌落，然后接種特定菌落微生物進(jìn)行純化培養(yǎng)。

培養(yǎng)基的成分：一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣等的要求。

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：在動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)液中需加入有機(jī)鹽、無(wú)機(jī)鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸及血清（兩鹽、兩素、兩酸、一血清），以保證細(xì)胞的正常生命活動(dòng)。

胚胎移植：一般將胚胎培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚時(shí)期即可進(jìn)行移植，在移植之前可以進(jìn)行胚胎性別鑒定確定胚胎性別，也可以進(jìn)行胚胎分割，增加胚胎數(shù)目，但是注意在分割時(shí)需要將胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，保證分割后胚胎發(fā)育正常。

（一）（1）將土壤懸浮液進(jìn)行梯度稀釋時(shí)應(yīng)用無(wú)菌水，以防止樣品被雜菌污染。①②培養(yǎng)基都可長(zhǎng)出菌落，所以按物理性質(zhì)分屬于固體培養(yǎng)基。對(duì)接種環(huán)滅菌的方法是灼燒滅菌。涂布到培養(yǎng)基上的菌懸液過(guò)多易造成防止菌體堆積得不到由單個(gè)真菌形成的菌落。

（2）①中挑取的單菌落應(yīng)是能夠分泌漆酶的品種，培養(yǎng)基中含有愈創(chuàng)木酚，若菌體可以分泌漆酶，則菌落周圍會(huì)有紅棕色氧化圈出現(xiàn)。有些菌種可直接分泌紅棕色物質(zhì)，所以在不含愈創(chuàng)木酚的培養(yǎng)基上再接種一次，確定培養(yǎng)基顏色變化為菌落本身的顏色還是分泌漆酶所導(dǎo)致的顏色變化。

（3）分析圖2可知：AS和A兩種處理的降解率明顯高于CK和S兩組，而AS和A之間差異不顯著，AS和A均加入了5mL的F-5菌株培養(yǎng)物，而CK和S兩組未加，所以土壤多環(huán)芳烴降解的主要原因是接種真菌F-5。供試土壤為長(zhǎng)期污染的土壤，其中可能含有具有一定降解功能的土壤微生物，S組較CK組多加入了玉米粉，所以S組的降解率顯著高于CK的原因可能為：添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可以在一定程度上刺激并強(qiáng)化土壤微生物的功能。

（二）（1）動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，由于人們對(duì)動(dòng)物細(xì)胞所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還沒(méi)有完全弄清楚，因此在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需在培養(yǎng)基中加入動(dòng)物血清或血漿。

（2）由于卵母細(xì)胞的質(zhì)中含有能使已分化的核表達(dá)出全能性的營(yíng)養(yǎng)和物質(zhì),所以體細(xì)胞核移植時(shí)一般將細(xì)胞核移植到去核卵母細(xì)胞中。圖中④表示將克隆胚胎移入代孕個(gè)體丙，所以表示胚胎移植技術(shù)。

（3）克隆個(gè)體的基因型與核供體相同，所以克隆猴“中中”和“華華”核基因組理論上與甲一致。微衛(wèi)星序列是1-4個(gè)堿基的重復(fù)序列，不同個(gè)體間重復(fù)次數(shù)往往不同，說(shuō)明微衛(wèi)星位點(diǎn)的堿基序列容易重復(fù)或缺失，因此微衛(wèi)星位點(diǎn)容易發(fā)生變異，選用多個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)而非個(gè)別微衛(wèi)星位點(diǎn)可以防止個(gè)別位點(diǎn)突變?cè)斐蓹z測(cè)誤差，因此選用多個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的目的是減小誤差，提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。性狀由基因與環(huán)境相互作用控制，基因包括核基因和質(zhì)基因，所以“中中”和“華華”的有些性狀與核基因組供體并不完全相同，除環(huán)境因素外，就是受卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)的影響。