Question

【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列現(xiàn)有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I 4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G ↓ GATCC、↓GATC、CCC ↓GGG。 請回答下列問題：

（1）若用限制酶Sma I完全切割圖1中DNA片段，其產(chǎn)物長度為____________________。

（2）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛�因d。從隱性純合子分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，產(chǎn)物中共有____種不同DNA片段。為了提高實驗成功率，需要通過______________技術(shù)擴(kuò)增目的基因，以獲得大量的目的基因。

（3）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是______________。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含質(zhì)粒的大腸桿菌，一般先用添加_________的培養(yǎng)基

進(jìn)行培養(yǎng)，然后將生長的菌接種到只含____________的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可進(jìn)一步篩選出含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞。

（4）假設(shè)用BamH I切割DNA獲取目的基因，用Mbo I切割質(zhì)粒，然后形成重組質(zhì)粒， 若將插入在抗生素B抗性基因處的目的基因重新切割下來，能否用BajnH I ? ___________。為什么？______________________。

Answer 1

【答案】（8分）

（1）533bp、794bp、661bp

（2）2 PCR

（3）BamH I 抗生素B 抗生素A

（4）不一定 因為目的基因和抗生素B抗性基因拼接處不一定出現(xiàn)GGATCC

【解析】（1）根據(jù)圖1中的酶切位點，可判斷用限制酶SmaⅠ完全切割該DNA片段，其產(chǎn)物長度為530+3=533bp、800-3-3=794bp、658+3=661bp。

（2）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換，基因D就突變?yōu)榛�因d，那么基因d上只有一個限制酶SmaⅠ切割位點，被限制酶SmaⅠ切割的產(chǎn)物長度為534+796-3=1327kb、658+3=661bp，因此從隱性純合子（dd）分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有2種不同DNA片段。為了提高試驗成功率，需要通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，以獲得大量的目的基因。

（3）由圖1可知，目的基因兩側(cè)是GGATCC序列，該序列是限制酶BamHⅠ的識別序列，因此要將質(zhì)粒和目的基因D連接形成重組質(zhì)粒，應(yīng)選用限制酶BamHⅠ切割。用限制酶BamHⅠ切割質(zhì)粒后，用限制酶BamHⅠ切割破壞了抗生素A抗性基因，但沒有破環(huán)抗生素B抗性基因，因此首先用含有抗生素B的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，能生存下來的是含有普通質(zhì)粒和重組質(zhì)粒的大腸桿菌；再用含有抗生素A的培養(yǎng)基培養(yǎng)，能生存下來的是含有普通質(zhì)粒的大腸桿菌．最后能在培養(yǎng)皿1上生存，但不能在培養(yǎng)皿2上生存的大腸桿菌菌落進(jìn)行培養(yǎng)，即可得到含重組質(zhì)粒的大腸桿菌。

（4）若將插入在抗生素B抗性基因處的目的基因重新切割下來，不一定能用BajnH，因為目的基因和抗生素B抗性基因拼接處不一定出現(xiàn)GGATCC。