【題目】CAR-T細胞療法是通過設(shè)計CAR基因,并導(dǎo)入癌癥患者的T細胞中,使其轉(zhuǎn)化為CAR-T細胞,CAR-T細胞膜上的CAR蛋白與癌細胞表面抗原特異結(jié)合后,激活CAR-T細胞使其增殖、分化,從而實現(xiàn)對癌細胞的特異性殺傷和記憶,主要過程如下圖。請回答:

1)要獲取CAR基因,可采取PCR技術(shù)進行大量擴增,其原理是___________________。

2)將CAR基因?qū)牖颊?/span>T細胞前,需完成過程①,該過程所需要的酶有__________,連接形成pCDH—CAR上除了目的基因外,還有一些必須的部分,比如__________,它可使轉(zhuǎn)錄在需要的地方停止下來。

3)完成過程②的常用方法是__________法,受體細胞是__________

4)檢測CAR-T細胞能夠產(chǎn)生CAR蛋白所采取的方法是__________

5)構(gòu)建好的CAR-T細胞還需要再體外進行擴增,擴增時需要定期更換培養(yǎng)液,這樣做的目的是______________________________。

【答案】DNA雙鏈的復(fù)制 限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶 終止子 顯微注射法 患者的T細胞 抗原—抗體分子雜交 清除代謝產(chǎn)物,防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成傷害

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟:(1)目的基因的獲取:方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。(2)基因表達載體的構(gòu)建:是基因工程的核心步驟,基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。(3)將目的基因?qū)胧荏w細胞:根據(jù)受體細胞不同,導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法;將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法;將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。(4)目的基因的檢測與鑒定:分子水平上的檢測:①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù);②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù);③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定:抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

1PCR技術(shù)又叫DNA的體外擴增技術(shù),其原理是DNA雙鏈的復(fù)制。

2)過程①表示基因表達載體的構(gòu)建,該過程需要限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶,連接形成基因表達載體pCDHCAR上除了目的基因外,還有啟動子、終止子、標記基因等,其中終止子可使轉(zhuǎn)錄在需要的地方停止下來。

3)過程②表示導(dǎo)入受體細胞,由圖可知,其受體細胞是患者的T細胞,導(dǎo)入動物細胞常用方法是顯微注射法。

4)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)所采取的方法是抗原—抗體分子雜交。

5)構(gòu)建好的CAR-T細胞擴增時需要定期更換培養(yǎng)液,這樣做的目的是清除代謝產(chǎn)物,防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成傷害。

練習(xí)冊系列答案
相關(guān)習(xí)題

科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】果蠅控制紅眼的基因(B)和白眼的基因(b)位于X染色體上;控制體毛性狀的基因(H/h)位于常染色體上。回答下列問題:

1)甲組同學(xué)用多只紅眼果蠅與多只白眼果蠅雜交,F1全為紅眼,F1雌雄果蠅相互交配,F2紅眼:白眼=3:1。親本果蠅的基因型為:____________,請寫出推導(dǎo)過程________________________。

2)乙組同學(xué)將一只多休毛雄蠅與多只正常體毛雌蠅雜交(假設(shè)每只雌蠅產(chǎn)生的子代數(shù)量均相等),統(tǒng)計F1,多體毛與正常體毛之比約為1:5?梢耘袛啵____________是隱性性狀;分析多體毛與正常體毛之比約為1:5的原因:________________________。

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】某生物興趣小組在“蛋白質(zhì)的提取和分離”實驗中,準備從豬的血液中初步提取血紅蛋白,設(shè)計的“血紅蛋白提取、分離流程圖”如下:

實驗準備(配制緩沖液、血細胞懸液)→樣品處理(洗滌、破碎、離心等)→蛋白質(zhì)粗分離(透析)→純化、純度鑒定(凝膠色譜法、電泳等)

請回答下列有關(guān)問題:

(1)樣品處理中紅細胞的洗滌要用________________反復(fù)沖洗、離心。向紅細胞懸液中加入一定量的低濃度pH=7.0的緩沖液并充分攪拌,可以破碎紅細胞,破碎細胞的原理是________________。

(2)血紅蛋白粗分離階段,透析的目的是________,若要盡快達到理想的透析效果,可以________________(寫出一種方法)。

(3)電泳利用了待分離樣品中各種分子的________等的差異,而產(chǎn)生不同遷移速度,實現(xiàn)各種分子的分離。

(4)一同學(xué)通過血紅蛋白醋酸纖維薄膜電泳,觀察到正常人和鐮刀型細胞貧血癥患者的血紅蛋白電泳結(jié)果如下圖所示。由圖可知攜帶者有________種血紅蛋白,從分子遺傳學(xué)的角度作出的解釋是________________

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】如圖表示人體內(nèi)某種免疫疾病的致病機理,下列敘述正確的是(

A.a可表示漿細胞或記憶細胞

B.紅細胞膜上有針對該抗體的抗原

C.吞噬細胞也可參與人體第一道防線

D.該病與艾滋病的致病機理是相同的

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】已知來航雞羽毛的顏色由A、aB、b兩對等位基因控制,B、b分別控制黑色和白色,A能抑制B的表達,A存在時羽毛表現(xiàn)為白色。某研究小組用兩個純合白色個體為親本進行了如下實驗,發(fā)現(xiàn)F2中黑色羽毛來航雞的雌雄個體數(shù)均保持相同;卮鹣铝袉栴}:

1A、aBb兩對等位基因的遺傳___________(填“符合”或“不符合”)基因的自由組合定律,判斷依據(jù)是___________

2)白色親本的基因型分別為___________,若將F1與基因型為隱性純合的個體進行交配,則子代表現(xiàn)型及比例為___________,該交配方式稱為___________。

3F2黑色個體中純合子占________,若將F2黑色個體進行自由交配得F3,則F3中雜合子占________,黑色個體占___________。

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】某種呼吸鏈突變型酵母菌在氧氣充足時,丙酮酸不能徹底氧化分解。下列說法正確的是(

A.突變型醇母菌呼吸鏈中斷的部位為線粒體,野生型酵母菌在氧氣充足時呼吸產(chǎn)物有H2O生成

B.突變型酵母菌不能產(chǎn)生[H]H2O,能產(chǎn)生酒精和少量ATP

C.氧氣充足時,突變型酵母種群的增殖速率大于野生型

D.野生型酵母菌分解C6H12O6時,若CO2產(chǎn)生量∶O2消耗量>43,則有氧呼吸占優(yōu)勢

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】為研究環(huán)境因素對某植物光合作用強度的影響,設(shè)計圖甲所示實驗裝置若干(已知密閉小室內(nèi)的CO2充足,光照不影響溫度變化),在相同溫度條件下進行實驗,一段時間后測量每個小室中的氣體釋放量繪制曲線如圖乙。下列敘述正確的是(

A.若距離s突然由a時變?yōu)?/span>b,短時間內(nèi)葉綠體中C3的含量減少

B.K點時葉肉細胞產(chǎn)生[H]的細胞器是細胞質(zhì)基質(zhì)、葉綠體和線粒體

C.I-K段表示該植物光合作用逐漸減弱,K-L段表示呼吸作用逐漸增強

D.L點時該植物仍能進行光合作用

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】下圖為植物細胞融合及組織培養(yǎng)過程示意圖。下列說法不正確的是( )

A. 植物體細胞雜交的最大優(yōu)點是可以克服遠緣雜交不親和的障礙

B. 雜種細胞經(jīng)過④和⑤過程可以培育成雜種植株,說明雜種細胞具有全能性

C. 盡管愈傷組織可以進行光合作用,但其培養(yǎng)基中仍需要糖類、氨基酸等有機營養(yǎng)

D. 若A的基因型為Rr,B的基因型為Yy,則最終形成的雜種植株的基因型為RrYy

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】為生產(chǎn)具有特定性能的α-淀粉酶,研究人員從某種海洋細菌中克隆了α-淀粉酶基因(1 656個堿基對),利用基因工程大量制備α-淀粉酶,實驗流程見下圖。請回答下列問題:

(1)利用PCR技術(shù)擴增α-淀粉酶基因前,需先獲得細菌的________。

(2)為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接,需在引物的________端加上限制性酶切位點,且常在兩條引物上設(shè)計加入不同的限制性酶切位點,主要目的是________。

(3)進行擴增時,反應(yīng)的溫度和時間需根據(jù)具體情況進行設(shè)定,下列選項中________的設(shè)定與引物有關(guān),________的設(shè)定與擴增片段的長度有關(guān)。(填序號)

①變性溫度 ②退火溫度 ③延伸溫度 ④變性時間 ⑤退火時間 ⑥延伸時間

(4)下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼α-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列:

圖中虛線框內(nèi)mRNA片段包含________個密碼子,如虛線框后的序列未知,預(yù)測虛線框后的第一個密碼子最多有________種。

(5)獲得工程菌表達的α-淀粉酶后,為探究影響酶活性的因素,以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測定酶活性,結(jié)果如下:

緩沖液

50 mmol/L Na2HPO4-KH2PO4

50 mmol/L Tris-HCl

50 mmol/L Gly-NaOH

pH

6.0

6.5

7.0

7.5

7.5

8.0

8.5

9.0

9.0

9.5

10.0

10.5

酶相對活性%

25.4

40.2

49.8

63.2

70.1

95.5

99.5

85.3

68.1

63.7

41.5

20.8

根據(jù)上述實驗結(jié)果,初步判斷該α-淀粉酶活性最高的條件為________。

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