Question

11．艾滋病病毒（HIV）外殼的包膜上有多種蛋白質(zhì)，其中包膜糖蛋白（env）基因編碼gpl60蛋白，進(jìn)一步加工成gpl20蛋白，具有較強(qiáng)的抗原性．制備抗HIV gpl20的單克隆抗體，為艾滋病的治療帶來(lái)希望．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）若利用動(dòng)物細(xì)胞工程制備抗HIV gpl20的單克隆抗體，涉及到的技術(shù)手段主要有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)．
（2）細(xì)胞融合常用的生物誘導(dǎo)劑是滅活的病毒．融合后需要用特定的選擇性培養(yǎng)基篩選，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長(zhǎng)，這種細(xì)胞的特點(diǎn)是既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗HIVgpl20抗體．
（3）若要大量制備該單克隆抗體，可將篩選出來(lái)的細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中通入一定濃度的CO₂，主要作用是維持培養(yǎng)液的pH．
（4）科研人員設(shè)想用基因工程制備能表達(dá)抗HIV pl20抗體的重組細(xì)胞，獲得目的基因可利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，需要在反應(yīng)體系中添加的有機(jī)物有引物和模板DNA、Taq酶和4種脫氧核苷酸．利用顯微注射法將目的基因?qū)�入骨髓瘤�?xì)胞．基因工程的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．

Answer 1

分析 1、單克隆抗體的制備過(guò)程中利用了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，在制備的過(guò)程中的兩次篩選考生必須識(shí)記，同時(shí)在進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)的過(guò)程需注意培養(yǎng)條件．
2、有關(guān)PCR技術(shù)的相關(guān)知識(shí)：
（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)．
（2）原理：DNA復(fù)制．
（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對(duì)引物．
（4）過(guò)程：①高溫變性：DNA解旋過(guò)程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈．PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開．

解答 解：（1）單克隆抗體的制備過(guò)程中，首先利用了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)獲得雜交細(xì)胞，然后利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞．
（2）細(xì)胞融合常用的生物誘導(dǎo)劑是滅活的病毒．融合后需要用特定的選擇性培養(yǎng)基篩選，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)，該細(xì)胞的特點(diǎn)是既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗HIV gpl20抗體．
（3）若要大量制備該單克隆抗體，可將篩選出來(lái)的細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中通入一定濃度的CO₂，來(lái)維持培養(yǎng)液的pH．
（4）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中，需要在反應(yīng)體系中添加兩種引物和模板DNA、Taq酶和4種脫氧核苷酸．利用顯微注射法將目的基因?qū)�入骨髓瘤�?xì)胞．基因工程的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．
故答案為：
（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)
（2）滅活的病毒       雜種細(xì)胞    既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗HIV gpl20抗體
（3）維持培養(yǎng)液的pH
（4）引物和模板DNA     顯微注射    基因表達(dá)載體的構(gòu)建

點(diǎn)評(píng) 本題考查了單克隆抗體的制備以及基因工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記單克隆抗體的制備過(guò)程以及應(yīng)用的相關(guān)技術(shù)，掌握PCR技術(shù)的原理和條件，識(shí)記基因工程的操作步驟等，再結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題．