Question

【題目】下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。請(qǐng)回答下面問題：

（1）經(jīng)過HAT培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)的細(xì)胞，還需要進(jìn)一步培養(yǎng)和篩選。篩選過程通常通過“有限稀釋法”完成，具體做法是：將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞稀釋到適宜濃度，再向細(xì)胞培養(yǎng)板（如圖）的每個(gè)孔中滴加適量的稀釋液，其概率為每孔內(nèi)落入一個(gè)細(xì)胞，從而能達(dá)到____________的目的；培養(yǎng)一段時(shí)間后取上清液，上清液能與____________結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個(gè)細(xì)胞，繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，重復(fù)若干次，直到確信每孔中增殖細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。

（2）將所選的細(xì)胞在體外條件下進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中應(yīng)嚴(yán)格控制無菌無毒的環(huán)境。其中，要控制無菌環(huán)境應(yīng)進(jìn)行的操作有______________________________、________________________。

（3）在培養(yǎng)細(xì)胞的過程中，細(xì)胞內(nèi)合成的特異性抗體通過____________方式排出細(xì)胞，該過程____________（填“需要”或“不需要”）膜上蛋白質(zhì)的參與。

（4）單克隆抗體用作體外診斷試劑，可以高效準(zhǔn)確地進(jìn)行人類疾病和動(dòng)植物病害的診斷和病原鑒定。其原理是______________________________。

Answer 1

【答案】單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體純度（或克隆化培養(yǎng)） 特定抗原 對(duì)培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理 向培養(yǎng)液添加一定量的抗生素 胞吐 不需要 單克隆抗體純度高、特異性強(qiáng)，能準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原的細(xì)微差異，并和特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合

【解析】

將特定的抗原注射小鼠，篩選出產(chǎn)生抗體的淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞融合，轉(zhuǎn)移到HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，未融合的細(xì)胞死亡，而雜交瘤細(xì)胞存活，雜交瘤細(xì)胞分開培養(yǎng)，選育出產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞。

（1）為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞稀釋到7～10個(gè)細(xì)胞/ml，每孔滴入0.1ml細(xì)胞稀釋液，其目的是使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的（或單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）；培養(yǎng)一段時(shí)間后取上清液，上清液能與特定抗原合的培養(yǎng)孔為陽性孔。

（2）通過對(duì)培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理，控制無菌環(huán)境。

（3）特異性抗體化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，以胞吐方式排出細(xì)胞，胞吐的過程需要消耗能量，但不需要載體蛋白的協(xié)助。

（4）單克隆抗體純度高、特異性強(qiáng)，能準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原的細(xì)微差異，并和特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，所以單克隆抗體用作體外診斷試劑，可以高效準(zhǔn)確地進(jìn)行人類疾病和動(dòng)植物病害的診斷和病原鑒定。