Question

【題目】苜蓿夜蛾是番茄的主要害蟲之一。某實驗室將抗蟲基因轉(zhuǎn)入番茄，培育出抗蟲番茄。下圖是獲得轉(zhuǎn)基因番茄的技術(shù)流程[注：卡那霉素抗性基因（kanR）作為標記基因，番茄葉片對卡那霉素高度敏感]，請據(jù)圖回答：

（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程中需要用到的工具酶為__________和DNA連接酶；DNA連接酶根據(jù)來源分為兩類：T4DNA連接酶和E·coli DNA連接酶。這兩種酶作用有所差別：__________只能連接雙鏈DNA的黏性末端，而__________既可以連接雙鏈DNA的黏性末端，又可以“縫合”雙鏈DNA的齊平末端。

（2）土壤農(nóng)桿菌的感染特點是能在自然條件下感染__________植物和裸子植物，而對大多數(shù)__________植物沒有感染能力。

（3）將重組質(zhì)粒導入土壤農(nóng)桿菌的目的是利用農(nóng)桿菌能夠感染番茄細胞，并將__________轉(zhuǎn)移至受體細胞的特點，使目的基因進入受體細胞中，并插入到番茄細胞的__________上，最終形成轉(zhuǎn)基因植株。

（4）將經(jīng)過__________形成的愈傷組織轉(zhuǎn)移到添加一定濃度植物激素和__________的培養(yǎng)基中，在適宜條件下進行培養(yǎng)，篩選出轉(zhuǎn)基因番茄。

（5）用PCR方法檢測轉(zhuǎn)基因番茄是否含有目的基因時，需根據(jù)________________的核苷酸序列設(shè)計特異引物，以____________________為模板進行第一輪擴增。

Answer 1

【答案】（1）限制性核酸內(nèi)切酶 E.coliDNA連接酶 T4DNA連接酶

（2）雙子葉 單子葉 T-DNA DNA

（4）脫分化 卡那霉素

（5）抗蟲基因（目的基因） 轉(zhuǎn)基因番茄的DNA（或含目的基因的番茄DNA）

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：目的基因的獲取（方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成）→基因表達載體的構(gòu)建（是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等）→將目的基因?qū)�入受體細胞【根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其原理是農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上】、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法）→目的基因的檢測與鑒定（分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等）。

（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程中需要用到的工具酶為限制性核酸內(nèi)切酶（切割含有目的基因的外源DNA分子和質(zhì)粒）和DNA連接酶（將目的基因和質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒）；DNA連接酶根據(jù)來源分為兩類：T4DNA連接酶和EcoliDNA連接酶，其中EcoliDNA連接酶只能連接雙鏈DNA的黏性末端，而T4DNA連接酶既可以連接雙鏈DNA的黏性末端，又可以“縫合”雙鏈DNA的齊平末端。

（2）土壤農(nóng)桿菌的感染特點是能在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物，而對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力。

（3）將重組質(zhì)粒導入土壤農(nóng)桿菌的目的是利用農(nóng)桿菌能夠感染番茄細胞，并將T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細胞的特點，使目的基因進入受體細胞中，并插入到番茄細胞的DNA上，最終形成轉(zhuǎn)基因植株。

（4）愈傷組織是經(jīng)過脫分化過程形成的；由圖可知，標記基因是卡那霉素抗性基因，因此將形成的愈傷組織轉(zhuǎn)移到添加一定濃度植物激素和卡那霉素的培養(yǎng)基中，在適宜條件下進行培養(yǎng)，篩選出轉(zhuǎn)基因番茄。

（5）用PCR方法檢測轉(zhuǎn)基因番茄是否含有目的基因時，需根據(jù)抗蟲基因（目的基因）的核苷酸序列設(shè)計特異引物，以轉(zhuǎn)基因番茄的DNA（或“含目的基因的番茄DNA”）為模板進行第一輪擴增。