Question

18．某質粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因．利用此質粒獲得轉基因抗鹽煙草的過程如圖1所示，請回答下列問題．

（1）將抗鹽基因導入煙草細胞內(nèi)，使煙草植株產(chǎn)生抗鹽性狀，這種新性狀（變異性狀）的來源屬于基因重組．
（2）在構建重組質粒時，應選用SalI和HindIII兩種酶對質粒和抗鹽基因的DNA進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．
（3）基因工程中的檢測篩選是一個重要的步驟．為篩選出導入了重組質粒的農(nóng)桿菌，圖2表示運用影印培養(yǎng)法（使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法）檢測基因表達載體是否導入了農(nóng)桿菌．
培養(yǎng)基除了含有細菌生長繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有氨芐青霉素、四環(huán)素（氨芐青霉素和四環(huán)素）．從檢測篩選的結果分析，含有目的基因的是4和6菌落中的細菌．為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標記的抗鹽基因作探針進行分子水平檢測，又要用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株（將煙草植株移栽到鹽堿地中）的方法從個體水平鑒定煙草植株的耐鹽性．

Answer 1

分析 分析圖1：圖示為轉基因抗鹽煙草的培育過程，首先構建基因表達載體；其次采用農(nóng)桿菌轉化法將目的基因導入受體細胞（煙草細胞）；再采用植物組織培養(yǎng)技術將含有目的基因的煙草細胞培養(yǎng)成轉基因抗鹽煙草．
分析圖2：圖2是篩選含有重組質粒的農(nóng)桿菌的過程，培養(yǎng)基A和B中應該分別加入氨芐青霉素、四環(huán)素．

解答 解：（1）基因工程的原理是基因重組．
（2）質粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三種限制酶切割位點，其中BamHI的切割位點位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因；若只用SalI一種限制酶切割可能會導致目的基因與運載體反向連接；因此在構建重組質粒時，應選用SalI和HindIII兩種限制酶對質粒和抗鹽基因進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．
（3）用SalI和HindIII兩種限制酶對質粒進行切割時，會破會四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入重組質粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存，所以培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有氨芐青霉素、四環(huán)素，含目的基因的是4和6菌落中的細菌．探針是指用放射性同位素標記的目的基因（抗鹽基因）．除了從分子水平上進行檢測，還可以從個體水平上進行鑒定，即用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株來鑒定煙草的耐鹽性．
故答案為：
（1）基因重組
（2）Sal I Hind III 質粒 抗鹽基因的DNA
（3）氨芐青霉素 四環(huán)素（氨芐青霉素和四環(huán)素） 4和6 抗鹽基因 一定濃度的鹽水澆灌煙草植株（將煙草植株移栽到鹽堿地中）

點評 本題結合轉基因抗鹽煙草的培育過程圖，考查基因工程、植物組織培養(yǎng)等知識，要求考生識記基因工程的原理、工具及操作步驟，能根據(jù)圖中限制酶的位置及題干要求選擇正確的限制酶；能根據(jù)題中信息判斷培養(yǎng)基中抗生素的名稱；識記植物組織培養(yǎng)過程及條件．