Question

【題目】【加試題】

Ⅰ．轉基因克隆豬已在我國培育成功。研究組首先從豬胚胎皮膚細胞中分離出纖維細胞，進行體外培養(yǎng)。通過電穿孔的方法將構建好的基因表達載體轉入纖維細胞，經(jīng)篩選后將轉基因纖維細胞進行體細胞克隆，再將重組胚胎移入代孕母豬子宮內(nèi)，最終獲得轉基因克隆豬。請回答：

（1）在對豬纖維細胞進行培養(yǎng)時，需要在細胞培養(yǎng)液中添加一定量的 ，以防止培養(yǎng)過程的污染。此外，應定期更換培養(yǎng)液，防止 對細胞自身造成危害。

（2）篩選轉基因細胞時，需要用到基因表達載體中的 。

（3）在進行體細胞克隆前，先要從屠宰場收集豬卵巢，采集 ，并在體外培養(yǎng)成熟。然后將轉基因纖維細胞核注入 中，再經(jīng)過一系列過程獲得含有目的基因的重組胚胎。

（4）為了提高重組胚胎的利用率，可對處于 階段的胚胎進行均等分割，再將重組胚胎移入代孕母豬子宮中繼續(xù)發(fā)育成轉基因克隆豬。一般地，代孕母豬需要用激素處理處理，促使其 以利于受孕。

Ⅱ．土壤中有些細菌含有脲酶，可通過降解尿素作為其生長的氮源�，F(xiàn)對土壤中的這類細菌進行分離實驗，請回答：

（1）分離培養(yǎng)細菌時必須進行無菌操作，包括培養(yǎng)基和各種器皿都必須是無菌的，常用的滅菌方法有 （至少答2種）。

（2）可用 法分離純化得到能降解尿素的菌種。在接種活菌的過程中，要在 旁進行操作，接種后的培養(yǎng)皿 于37℃的 中培養(yǎng)。

（3）用含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基篩選能分泌脲酶的細菌，若培養(yǎng)基中存在分解尿素的細菌，其菌落周圍會出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是由于尿素被分解產(chǎn)生的 使PH升高，使酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化，從而證明這一菌株以尿素為氮源。變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力 。

Answer 1

【答案】Ⅰ

（1）抗生素 細胞代謝產(chǎn)物積累

（2）標記基因

（3）卵母細胞 去核卵細胞

（4）桑椹胚或囊胚 同期發(fā)情

Ⅱ

（1）高壓蒸氣滅菌、灼燒滅菌（或干熱滅菌）

（2）涂布分離 或劃線分離 酒精燈倒置 恒溫培養(yǎng)箱

（3）氨 越強

【解析】Ⅰ．（1）在對纖維細胞進行培養(yǎng)時，需要在細胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防止培養(yǎng)過程的污染。此外，應定期更換培養(yǎng)液，防止細胞代謝產(chǎn)物的積累對細胞自身造成危害。

（2）篩選轉基因細胞時，需要用到基因表達載體中的標記基因。

（3）在進行體細胞克隆前，先要從屠宰場收集豬卵巢，采集卵母細胞，并在體外培養(yǎng)成熟。然后將轉基因纖維細胞注入到去核卵母細胞中，再經(jīng)過一系列過程獲得含有目的基因重組胚胎。

（4）為了提高重組胚胎的利用率，可以對處于桑椹胚或囊胚階段的胚胎進行均等分割。將重組胚胎移入到受體子宮后，由于受體子宮不會對外來胚胎發(fā)生免疫排斥反應，并能與之建立正常的生理和組織上的聯(lián)系，因此，重組胚胎能在受體子宮中繼續(xù)發(fā)育成轉基因克隆豬。

Ⅱ．⑴常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌和干熱滅菌。

⑵在稀釋土壤溶液的過程中每一步都要在酒精燈火焰旁進行操作，防止雜菌污染；接種后的培養(yǎng)皿倒置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)皿倒置既可避免培養(yǎng)基中的水分過快地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，恒溫為微生物的快速生長提供溫度條件。

⑶含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基從功能上劃分該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基；尿素被分解產(chǎn)生的氨使pH升高，酚紅指示劑產(chǎn)生的顏色變化；變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力越強。