Question

下圖是將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)�人�?xì)菌細(xì)胞B制造工程菌的示意圖。已知細(xì)菌細(xì)胞B不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因。質(zhì)粒A導(dǎo)人細(xì)菌細(xì)胞B后，其上的基因能得到表達(dá)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題

（1）目的基因可通過(guò)PCR技術(shù)獲取，這一技術(shù)中需要的酶是              。

（2）將目的基因與質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒的過(guò)程中，需要的工具酶有          。

（3）若要檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)人，可在培養(yǎng)細(xì)菌B的培養(yǎng)基中加入         （氨卞青霉素／四環(huán)素），若在培養(yǎng)基上觀察到大量細(xì)菌B的菌落，表明目的基因已成功導(dǎo)  人細(xì)菌B，此時(shí)所用的培養(yǎng)基屬于            培養(yǎng)基（按用途分）。

（4）若要比較準(zhǔn)確地了解轉(zhuǎn)化率，一般可通過(guò)統(tǒng)計(jì)菌落的數(shù)目來(lái)推測(cè)活菌數(shù)目，還可以通過(guò)         的方法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目；前者統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)目比實(shí)際的數(shù)目       （多／少／一樣），原因是         。為了保證統(tǒng)計(jì)數(shù)目的準(zhǔn)確，還應(yīng)該設(shè)計(jì)         。

Answer 1

（1）耐高溫的DNA聚合酶

（2）防制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶

（3）四環(huán)素  選擇

（4）顯微鏡直接計(jì)數(shù)  少  當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落  對(duì)照實(shí)驗(yàn)

解析:

考查基因工程的操作方法、過(guò)程的識(shí)圖分析與有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作的設(shè)計(jì)評(píng)價(jià)。（1）基因工程中，獲取目的基因的方法有從基因文庫(kù)中獲得、從部分基因文庫(kù)中獲得、人工合成法以及用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，在PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因是在生物體外的高溫環(huán)境下進(jìn)行的，所以必須耐高溫的DNA聚合酶；

（2）將目的基因與質(zhì)粒結(jié)合構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，必須用相同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒以獲得相同的粘性末端，同時(shí)還必須借助于DNA連接酶，將二者黏合；

（3）由于目的基因的導(dǎo)入，使四環(huán)素的抗性基因破壞，因此，重組質(zhì)粒不在具有康四環(huán)素的性狀表達(dá)，只有康氨芐青霉素的性狀作為標(biāo)記性狀，加入氨芐青霉素的培養(yǎng)基具有選擇作用，因此屬于選擇性培養(yǎng)基；

（4）除應(yīng)用活菌落計(jì)數(shù)外，還可借助血細(xì)胞計(jì)數(shù)板用顯微鏡直接計(jì)數(shù)，活細(xì)胞計(jì)數(shù)法獲得的細(xì)菌數(shù)目比顯微鏡直接計(jì)數(shù)法獲得數(shù)目少，因?yàn)轱@微鏡下計(jì)數(shù)的的細(xì)菌數(shù)目既有活細(xì)菌、又有死細(xì)菌，因此，為保證計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，必須設(shè)置對(duì)照試驗(yàn)，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。