Question

【題目】人血清白蛋白(HSA) 具有重要的醫(yī)用價(jià)值，只能從人血漿中制備。下圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑。

（1）為獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取___________合成cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因。

（2）PCR技術(shù)的前提是需要引物，圖中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，請用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出另一條引物的位置及擴(kuò)增方向_____________。

（3）基因工程中的核心步驟是____________________，該環(huán)節(jié)可使目的基因在受體細(xì)胞中___________________________________________作用。啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動(dòng)子是____。

A.人血細(xì)胞啟動(dòng)子 B.水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子 C.大腸桿菌啟動(dòng)子 D.農(nóng)桿菌啟動(dòng)子

（4）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中，需添加酚類物質(zhì)，作用是____________。

Answer 1

【答案】總RNA（或mRNA） 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮 B 吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）為獲取HSA基因，可通過反轉(zhuǎn)錄法，首先需采集人的血液，提取總RNA合成總cDNA。然后以cDNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因。

（2）由于DNA兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械模瑥?fù)制時(shí)也是方向相反，如圖中箭頭箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，則另一條引物位于另一條鏈的相反一端，如圖所示

（3）基因工程中的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，故若構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動(dòng)子是水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子，故選B。

（4）由于酚類物質(zhì)能夠吸引農(nóng)桿菌移向受體細(xì)胞，并將農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，所以利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中，需要添加酚類物質(zhì)。