Question

【題目】轉基因抗蟲棉是將從蘇云金芽孢桿菌中分離出來的Bt毒蛋白基因轉入植物細胞培育獲得，回答下列相關問題。

（1）從蘇云金芽孢杄菌獲得Bt毒蛋白基因后，可通過PCR技術進行擴增，該過程需要有________作為引物，該技術中所用的酶是________。

（2）將Bt毒蛋白基因導入植物細胞常用________法，該方法中需將Bt基因插入到Ti質粒的________上，其原因是________________________。

（3）檢測Bt毒蛋白基因是否導入植物細胞，可以用________________________________作為探針進行檢測，導入成功的標志是________________________________。將含有Bt毒蛋白基因的植物細胞培育成抗蟲植株需通過________技術。

Answer 1

【答案】一段已知Bt毒蛋白基因的核苷酸序列 Taq酶（或熱穩(wěn)定DNA聚合酶） 農(nóng)桿菌轉化 T-DNA T-DNA可攜帶目的基因進入受體細胞，并整合到受體細胞的染色體DNA上 放射性同位素標記的Bt毒蛋白基因的一條鏈 顯示出雜交帶 植物組織培養(yǎng)

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取方法有：從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）PCR技術中所用的酶為耐高溫的熱穩(wěn)定DNA聚合酶，即Taq酶，PCR技術擴增目的基因首先要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。

（2）將目的基因導入植物細胞常用農(nóng)桿菌轉化法，該方法中，需將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，利用T-DNA的轉移作用，將目的基因攜帶進入受體細胞，并將目的基因整合到受體細胞染色體的DNA上。

（3）檢測目的基因是否導入受體細胞，用DNA分子雜交技術，該方法需用放射性同位素標記的Bt毒蛋白基因的一條鏈作為探針，若顯示雜交帶，則說明受體細胞中含有目的基因，導入成功。將含有目的基因的植物細胞培育成轉基因植株需通過植物組織培養(yǎng)技術。