Question

【題目】水中細(xì)菌總數(shù)可以作為判定被檢水樣被有機(jī)物污染程度的標(biāo)志。在水質(zhì)衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)中，細(xì)菌總數(shù)是指1mL水樣在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基中，經(jīng)37℃、24h培養(yǎng)后，所生長出的菌菌落數(shù)。為初步測定某處池水中的細(xì)菌數(shù)目，實(shí)驗(yàn)的大致流程為：

回答下列問題：

（1）對采集的池水進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，應(yīng)先將1mL水樣加入___________中以獲得稀釋10倍的稀釋液。實(shí)驗(yàn)中對采集的池水要進(jìn)行稀釋的原因是___________________________。

（2）接種培養(yǎng)所用到培養(yǎng)基中，能為細(xì)菌同時(shí)提供碳源和氮源的物質(zhì)是_________________________。

（3）為保證菌落計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在__________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。用這種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是____________________________。

（4）實(shí)驗(yàn)過程中為確保培養(yǎng)基上菌落來自所采集水樣，避免雜菌污染。實(shí)驗(yàn)中需要注意的具體操作有____________________________（至少答2點(diǎn)）。

Answer 1

【答案】 9ml無菌水 避免池水中細(xì)菌數(shù)目過多（密度過大），得不到單菌落 牛肉膏、蛋白胨 30—300 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落 采集水樣的容器要滅菌，稀釋和接種要在酒精燈火焰旁等

【解析】試題分析：題中只需要水中的細(xì)菌數(shù)目，不需要進(jìn)行鑒定，微生物培養(yǎng)中，對活菌計(jì)數(shù)常用稀釋涂布平板法，除此之外計(jì)數(shù)方法還有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。

（1）對池水進(jìn)行稀釋時(shí)，為了減少誤差，所用必須為無菌水，1ml水樣稀釋10倍，則加9ml無菌水；池水中細(xì)菌數(shù)目過多，在進(jìn)行涂布培養(yǎng)時(shí)不容易獲得單個(gè)菌落，使計(jì)數(shù)誤差較大。

（2）稀釋后的水樣接種在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)，牛肉膏、蛋白胨均含有蛋白質(zhì)、糖類等有機(jī)物，故其能為細(xì)菌同時(shí)提供碳源和氮源的物質(zhì)是牛肉膏、蛋白胨。

（3）為保證菌落計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30—300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)一般都會偏低，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。

（4）為避免雜菌污染，必須嚴(yán)格按照無菌技術(shù)，實(shí)驗(yàn)者、操作臺消毒處理；所用容器均需滅菌；整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行等。