Question

5．脲酶是催化尿素分解的特異性水解酶．該酶主要從刀豆等豆科植物提取，現(xiàn)被廣泛應(yīng)用于尿素廢水的凈化過(guò)程．請(qǐng)分析回答以下問(wèn)題：
（1）脲酶可以催化尿素分解為NH₃和C0₂，其中堿性物質(zhì)可以能使酚紅指示劑變?yōu)榧t色．
（2）為了提高脲酶的利用效率，可以采用固定化酶技術(shù)將其固定．酶的固定化方法有：吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、包埋法和交聯(lián)法．
（3）實(shí)驗(yàn)室中可以采用吸附法將該酶制成固定化酶柱，讓尿素廢水過(guò)柱前，先用10倍體積的蒸餾水洗滌酶柱，目的是除去未吸附的游離脲酶．
（4）脲酶除了從植物獲取外，還可以來(lái)源于土壤中的微生物．為了從土壤中分離得到以尿素為氮源的微生物，采用的分離方法操作最簡(jiǎn)便的是劃線(xiàn)分離法．下列有關(guān)該分離方法的操作敘述錯(cuò)誤的是D．
A．必須使用固體培養(yǎng)基
B．必須在酒精燈火焰旁接種
C．必須將接種后的培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)
D．必須將接種前的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、土壤懸浮液等進(jìn)行滅菌處理．

Answer 1

分析 1、選擇培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物
2、分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素．
3、微生物常見(jiàn)的接種的方法
①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線(xiàn)，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．

解答 解：（1）脲酶可以催化尿素分解為NH₃和C0₂，其中堿性物質(zhì)可以能使酚紅指示劑變?yōu)榧t色．
（2）酶的固定化方法有：吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、包埋法和交聯(lián)法．
（3）實(shí)驗(yàn)室中可以采用吸附法將該酶制成固定化酶柱，讓尿素廢水過(guò)柱前，先用10倍體積的蒸餾水洗滌酶柱，目的是除去未吸附的游離脲酶．
（4）分離微生物常用稀釋涂布平板法和平板劃線(xiàn)法，其中平板劃線(xiàn)法是從土壤中分離得到以尿素為氮源的微生物的最簡(jiǎn)便的方法．采用平板劃線(xiàn)法時(shí)，必須使用固體培養(yǎng)基；為了防止雜菌污染，必須在酒精燈火焰旁接種；配置培養(yǎng)基時(shí)，必須將接種后的培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，防止皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基污染培養(yǎng)基；必須將接種前的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌處理，對(duì)土壤懸浮液不能進(jìn)行滅菌處理，否則會(huì)殺死目的菌．故選：D．
案為：
（1）NH₃和C0₂     紅色
（2）交聯(lián)法
（3）除去未吸附的游離脲酶
（4）劃線(xiàn)分離法     D

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記接種微生物常用的兩種方法及注意事項(xiàng)，掌握無(wú)菌技術(shù)等；識(shí)記分解尿素的微生物的分離原理及方法等，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．