Question

【題目】人的淋巴細胞可以產生某種具有臨床價值的蛋白質（Y），目前可以利用現(xiàn)代生物技術生產Y�；卮鹣铝袉栴}：

（1）若要獲得Y的基因，可以從基因文庫中獲得，也可以利用PCR技術擴增目的基因�；�因文庫包括________和_______。目前在PCR反應中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是_______________。

（2）若產生蛋白質（Y）的淋巴細胞為B細胞，要大量制備相關單克隆抗體，將該B淋巴細胞與小鼠的___________細胞融合， 再經過篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細胞，該細胞具有的特點是_________。通過該方法得到的單克隆抗體具有__________等特性。

（3）天然的Y通常需要在低溫條件下保存。假設將Y的第6位氨基酸甲改變?yōu)榘被�酸乙可提高其熱穩(wěn)定性，若要根據(jù)蛋白質工程的原理對Y進行改造以提高其熱穩(wěn)定性，具體思路是______________________。

Answer 1

【答案】基因組文庫 cDNA文庫 Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活 骨髓瘤 既能迅速大量繁殖，又能產生專一的抗體 特異性強、靈敏度高 找到第6位氨基酸對應的堿基所在的基因位置，參照密碼子表，將第6位氨基酸甲對應的堿基替換為氨基酸乙對應的堿基

【解析】

1、基因工程的步驟：

（1）目的基因的獲取：從基因組文庫中直接獲��；PCR(多聚酶鏈式反應）技術擴增目的基因 ；通過DNA合成儀用化學方法直接人工合成。

（2）基因表達載體的構建

（3）將目的基因導入受體細胞

（4）目的基因的檢測與鑒定

2、蛋白質過程的基本途徑是：從預期的蛋白質功能出發(fā)→設計預期的蛋白質結構→推測應有的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列（基因）。
3、單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的效應B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為雜交瘤細胞，雜交瘤細胞既能產生抗體，又能無限增殖。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養(yǎng)成細胞群，可制備針對一種抗原的特異性抗體即單克隆抗體。

（1）根據(jù)題意可知：控制Y合成的基因是目的的基因，可以從基因文庫中獲得，也可以利用PCR技術擴增目的基因�；�因文庫包括基因組文庫和cDNA文庫。因為PCR反應過程中需要高溫條件下讓DNA變性，故在PCR技術中要用到耐高溫的Taq酶（該酶耐高溫，不容易失活），而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活。

（2）要大量制備相關單克隆抗體，需要用能產生蛋白質（Y）的淋巴細胞為B細胞小鼠的骨髓瘤細胞，然后讓這兩種細胞融合， 再經過篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細胞，該細胞具有的特點是既能迅速大量繁殖，又能產生專一的抗體。通過該方法得到的單克隆抗體具有的特性是特異性強、靈敏度高。

（3）天然的Y不耐高溫，通常需要低溫保存。假設將Y的第6位氨基酸甲改變?yōu)榘被�酸乙可提高其熱穩(wěn)定性，若要根據(jù)蛋白質工程的原理對Y進行改造以提高其熱穩(wěn)定性，需要首先改造控制Y合成的基因，具體思路為：找到第6位氨基酸對應的堿基所在的基因位置，參照密碼子表，將第6位氨基酸甲對應的堿基替換為氨基酸乙對應的堿基。