Question

CTAB法是一種從高等真核生物細(xì)胞中制備基因組DNA(總DNA)的技術(shù)。CTAB能跟核酸形成復(fù)合物，在高鹽溶液(>0.7 mol/L的NaCl溶液)中可溶并且穩(wěn)定存在，當(dāng)降低溶液中鹽的濃度(<0.3 mol/L的NaCl溶液)時(shí)，CTAB－核酸的復(fù)合物就會(huì)因溶解度降低而沉淀，再用70%酒精浸泡可洗脫掉CTAB；氯仿能使蛋白質(zhì)發(fā)生變性而沉淀。提取和檢測(cè)水稻基因組DNA的操作步驟如下：

①在50 mL離心管中加入20 mL的CTAB抽提緩沖液(主要成分是1.4 mol/L的NaCl、2%的CTAB)，于65℃水浴中預(yù)熱；

②將20 g新鮮的水稻幼嫩葉片剪成小段后放于研缽中，用液氮速凍并研磨成粉末，加入上述離心管中，于65℃水浴中保溫30 min；

③取出離心管，冷卻至室溫，加入20 mL的氯仿，輕輕混勻20 min；

④在室溫下以12000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10～20 min；

⑤將上清液移入另一個(gè)離心管中，加入2/3體積的經(jīng)冷卻的異丙醇，用玻璃棒輕輕攪動(dòng)，小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB－核酸的復(fù)合物沉淀；

⑥將沉淀移入另一個(gè)離心管中，加入70%乙醇洗滌，重復(fù)洗滌1～2次；

⑦吹干乙醇后，將DNA溶于適量的TE緩沖液中，在0.8%的瓊脂糖凝膠上電泳分離并在核酸紫外檢測(cè)儀上觀(guān)察。

請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)植物基因組DNA(總DNA)的提取通常采用機(jī)械研磨的方法，常溫下研磨時(shí)，植物細(xì)胞勻漿中含有的多種酶會(huì)對(duì)DNA的提取產(chǎn)生不利影響。用液氮速凍，材料在研磨時(shí)易破碎，同時(shí)還具有_______________________________。

(2)實(shí)驗(yàn)步驟③、④的目的是________________________________。

(3)實(shí)驗(yàn)步驟⑤中，玻璃棒上出現(xiàn)沉淀的主要原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(4)對(duì)DNA進(jìn)行定性檢測(cè)常用的試劑是________，瓊脂糖凝膠電泳是利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及________、________，使帶電分子產(chǎn)生________而實(shí)現(xiàn)分離。DNA在260 nm的紫外線(xiàn)波段有一強(qiáng)烈的吸收峰，利用核酸紫外檢測(cè)儀可以進(jìn)行________。

 

Answer 1

(1)降低細(xì)胞勻漿中酶的活性，避免對(duì)DNA的提取產(chǎn)生不利的影響

(2)去除溶液中的蛋白質(zhì)(使蛋白質(zhì)變性和沉淀)

(3)NaCl溶液的濃度<0.3 mol/L，CTAB－核酸的復(fù)合物因溶解度降低而沉淀

(4)二苯胺　分子大小　形狀的不同　不同的遷移速度　DNA含量的測(cè)定(或檢測(cè)DNA)