Question

【題目】我國(guó)曾經(jīng)發(fā)生過(guò)因“非典型性肺炎”而死亡的病例，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，該病是由SARS病毒（一種RNA病毒）感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康復(fù)后的血清中有抗S蛋白的特異性抗體。某研究小組為了研制預(yù)防SARS病毒的疫苗，開(kāi)展了前期研究工作，其簡(jiǎn)要的操作流程如圖：

（1）實(shí)驗(yàn)步驟①所代表的反應(yīng)過(guò)程是________________。

（2）擴(kuò)增S蛋白基因時(shí)采用________________技術(shù)，該技術(shù)除了需要提供模板、原料外，還需要提供________________酶和________________種引物等條件。

（3）步驟⑤所采取的方法是________________，培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)所需氣體主要有O2和CO2，其中CO2的主要作用是_________________。

（4）經(jīng)步驟③后，通過(guò)分子雜交技術(shù)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌內(nèi)有S蛋白基因存在，但檢測(cè)不到相關(guān)的mRNA分子，可能原因是S蛋白基因上游缺少________________。

（5）為了檢驗(yàn)步驟④所表達(dá)的S蛋白是否與病毒S蛋白有相同的免疫反應(yīng)特性，根據(jù)題干的信息，可用步驟④表達(dá)出來(lái)的S蛋白與________________進(jìn)行抗原—抗體特異性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，從而得出結(jié)論。

Answer 1

【答案】反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄） PCR 熱穩(wěn)定的DNA聚合（Taq） 兩 顯微注射法 維持培養(yǎng)液的pH 啟動(dòng)子 SARS康復(fù)病人血清

【解析】

分析題圖：圖示表示研制預(yù)防SARS病毒的疫苗簡(jiǎn)要的操作流程，其中①是以RNA為模板合成DNA的逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，③表示將目的基因?qū)�入大腸桿菌細(xì)胞，④表示目的基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)；⑤表示將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞，⑥表示目的基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)。

（1）實(shí)驗(yàn)步驟①RNA控制DNA合成，該過(guò)程是逆轉(zhuǎn)錄。
（2）體外擴(kuò)增目的基因采用的是PCR技術(shù)，PCR技術(shù)的擴(kuò)增原理是DNA雙鏈復(fù)制，該技術(shù)需要模板、原料、熱穩(wěn)定的DNA聚合（Taq）酶和兩種引物。
（3）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞的方法是顯微注射法，培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)加入的CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pH穩(wěn)定。
（4）通過(guò)分子雜交技術(shù)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌內(nèi)有S蛋白基因存在，但檢測(cè)不到相關(guān)的mRNA分子，說(shuō)明大腸桿菌內(nèi)有目的基因，S基因沒(méi)有表達(dá)，原因可能是S蛋白基因上游缺少啟動(dòng)子。
（5）步驟④檢測(cè)所表達(dá)的S蛋白的特征，可用大腸桿菌中表達(dá)的S蛋白與SARS康復(fù)病人血清進(jìn)行抗原-抗體特異性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，如果能夠特異性的結(jié)合，說(shuō)明表達(dá)成功。