Question

萌發(fā)的禾谷類種子中淀粉酶活性較強，主要有α_—淀粉酶和β—淀粉酶。α_—淀粉酶不耐酸、較耐熱，在pH為3.6以下迅速失活，而β—淀粉酶不耐熱，在70℃ 15 min后失活。根據(jù)它們的這種特性，可分別測定一種酶的催化效率。請協(xié)助完成“測定小麥種子中α_—淀粉酶催化效率”的實驗。

實驗材料：萌發(fā)3天的小麥種子(芽長約1 cm)。

主要試劑及儀器：1 mg/mL的標準麥芽糖溶液、5%淀粉溶液、斐林試劑、蒸餾水、石英砂、恒溫水浴鍋等。

實驗步驟：

步驟一：制作麥芽糖梯度液，取7支干凈的具塞刻度試管，編號，按表加入試劑，再將試管置于60℃水浴中加熱2 min，取出后按試管號順序排列。

試劑	試管號
	1	2	3	4	5	6	7
麥芽糖標 準液(mL)	0	0.2	0.6	1.0	1.4	1.6	2.0
蒸餾水(mL)	2.0
麥芽糖含量(mg)	0	0.2	0.6	1.0	1.4	1.6	2.0
斐林試劑(mL)	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0

 

步驟二：制備酶液。

―→―→

步驟三：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

步驟四：另取四支試管，編號A、B、C、D，向A、B試管中各加5 mL 5%淀粉溶液，向C、D試管中分別加入2 mL已經(jīng)處理的酶溶液(忽略少量的麥芽糖)和蒸餾水，將四支試管置于40℃恒溫水浴中保溫10 min，然后將C、D試管中的溶液分別加入到A、B試管中，搖勻后繼續(xù)在40℃恒溫水浴中保溫10 min。

步驟五：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

結(jié)果分析：將A試管中顏色與第①步中獲得的麥芽糖標準液進行比較，獲得該試管中麥芽糖濃度，并計算出α—淀粉酶催化效率。

分析上述步驟回答：

(1)步驟一的2～7試管中加入蒸餾水的量分別是　　　　(單位mL)。

(2)實驗中B試管所起的具體作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

 

Answer 1

步驟三：將裝有淀粉酶溶液的試管置于70℃水浴中15 min，取出后迅速冷卻

步驟五：分別取A、B試管中反應(yīng)溶液各2 mL，向其中分別加入2 mL斐林試劑、60℃水浴加熱2 min后，觀察顏色變化　(1)1.8、1.4、1.0、0.6、0.4、0　(2)檢測實驗使用的淀粉溶液中是否存在還原糖

 

由題干可知，小麥種子中同時存在α、β兩種淀粉酶，而實驗?zāi)康氖菧y定α_—

淀粉酶的催化效率，故可將提取的混合酶液用70℃熱水處理15 min，以使β—淀粉酶失活，從而只保留有活性的α_—淀粉酶。α_—淀粉酶催化淀粉生成麥芽糖，加入斐林試劑后生成磚紅色沉淀，經(jīng)與標準麥芽糖對比，可知α_—淀粉酶的催化效率。