Question

紅細胞含有大量血紅蛋白，紅細胞的機能主要是由血紅蛋白完成，血紅蛋白的主要功能是攜帶O₂或CO₂，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進行實驗，來提取和分離血紅蛋白，請回答下列有關(guān)問題：

(1)血紅蛋白提取和分離的程序可分為四步；________、________、________和________。

(2)實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進行離心，收集血紅蛋白溶液。

①加入檸檬酸鈉的目的是____________________________________。

②在樣品處理中包括紅細胞的洗滌、____________、分離血紅蛋白溶液、透析。

③洗滌紅細胞的目的是____________，你如何知道紅細胞已洗滌干凈？ ______________________。

④分離紅細胞時對離心速度和離心時間的要求是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

⑤若離心速度過高和時間過長，結(jié)果會怎樣？________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(3)收集的血紅蛋白溶液在透析袋中透析，這就是樣品的粗分離。

①透析的目的是__________________________________________________________

________________________________________________________________________。

②透析的原理是_________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(4)然后通過凝膠色譜法將樣品進一步純化，最后經(jīng)SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定。

①樣品純化的目的是______________________________________________________

________________________________________________________________________。

②血紅蛋白有什么特點？_________________________________________________

________________________。這一特點對進行蛋白質(zhì)的分離有什么意義？________________________________________________________________________

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Answer 1

(1)樣品處理　粗分離　純化　純度鑒定　(2)①防止血液凝固�、谘�紅蛋白的釋放�、廴コ�雜蛋白　離心后的上清液沒有黃色�、艿退俣虝r間離心，如500 r/min離心2 min�、蓦x心速度過高和時間過長會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，得不到純凈的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度　(3)①去除相對分子量較小的雜質(zhì)�、谕肝龃�能使小分子自由進出，而大分子則保留在袋內(nèi)　(4)①通過凝膠色譜法將相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去�、谘�紅蛋白呈現(xiàn)紅色　在凝膠色譜分離時可通過觀察顏色來判斷什么時候應(yīng)該收集洗脫液，這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作

 

分離提取血紅蛋白的實驗流程大致是：樣品處理—粗分離—純化—純度鑒定四個步驟。檸檬酸鈉屬于抗凝劑。血紅蛋白是紅色含鐵的蛋白質(zhì)。凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)是依據(jù)蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量大小來進行的。