Question

14．圖1為單克隆抗體制備流程示意圖，圖2為生產(chǎn)破傷風桿菌抗體的實驗方案．請據(jù)圖回答問題．

（1）動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)．通常在合成培養(yǎng)基中加入適量血清，其原因是血清可以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)．細胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO₂的恒溫培養(yǎng)箱中進行，CO₂的作用是維持培養(yǎng)液pH．
（2）圖1中細胞融合是隨機的過程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是篩選雜交瘤細胞．
（3）圖1中為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細胞稀釋到7-10個細胞/mL，每孔滴入0.1mL細胞稀釋液，其目的是使每個小孔內(nèi)不多于一個細胞，達到制備單克隆培養(yǎng)的目的．
（4）圖2中②過程，常用滅活的病毒作為誘導(dǎo)劑．選出的細胞具備無限增殖、能分泌特異性抗體特點．
（5）圖2該方案能達到預(yù)期效果嗎？不能．原因是沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞．
（6）已知癌細胞X基因過量表達與肝腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，要試驗一種抗腫瘤藥物Y對癌細胞X基因表達量的影響，可將甲細胞分為甲、乙兩組，甲組細胞培養(yǎng)液中加入等量的藥物Y，乙組細胞培養(yǎng)液中加入無菌生理鹽水，經(jīng)培養(yǎng)后，從甲、乙兩組收集等量細胞，通過分別檢測X基因在甲、乙兩組細胞中的mRNA或蛋白質(zhì)合成水平的差異，確定Y的藥效．

Answer 1

分析 據(jù)圖1分析，將特定的抗原注射小鼠，篩選出產(chǎn)生抗體的淋巴細胞；與骨髓瘤細胞融合，轉(zhuǎn)移到HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，未融合的細胞死亡，而雜交瘤細胞存活；雜交瘤細胞分開培養(yǎng)，選育出產(chǎn)生高特異性抗體的細胞．
據(jù)圖2分析，①過程獲取B淋巴細胞；②過程是誘導(dǎo)細胞融合，篩選出雜交瘤細胞；③過程是細胞培養(yǎng)，④過程篩選能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞，⑤過程是通過小鼠腹腔中培養(yǎng)獲得大量的單克隆抗體或培養(yǎng)液中培養(yǎng)獲得大量的單克隆抗體．

解答 解：（1））動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)．通常在合成培養(yǎng)基中加入適量血清，原因是血清可以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，細胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO₂的恒溫培養(yǎng)箱中進行，CO₂的作用是維持培養(yǎng)液pH．
（2）據(jù)圖分析，骨髓瘤細胞在HAT培養(yǎng)基上無法生長，所以骨髓瘤細胞之間形成的融合細胞也不能在該培養(yǎng)基上存活；淋巴細胞和淋巴細胞自身融合的細胞能在HAT培養(yǎng)基上正常生活，但不能增殖，所以經(jīng)過培養(yǎng)后，HAT培養(yǎng)基上沒有淋巴細胞和淋巴細胞自身融合的細胞；骨髓瘤細胞與淋巴細胞之間形成的雜交瘤細胞能在HAT培養(yǎng)基上正常生活，并無限增殖．故HAT培養(yǎng)基培養(yǎng)目的是：篩選雜交瘤細胞．
（3）為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細胞稀釋到7～10個細胞/ml，每孔滴入0.1ml細胞稀釋液，其目的是使每個孔內(nèi)不多于一個細胞，達到單克隆培養(yǎng)的目的（或單一細胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）．
（4）植物細胞原生質(zhì)體融合常用物理法和化學法誘導(dǎo)劑，動物細胞融合還可以采用滅活的病毒．選出的細胞具備無限增殖、能分泌特異性抗體的特點．
（5）圖2 方案沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞．
（6）該實驗的目的是試驗一種抗腫瘤藥物Y對甲細胞生長的影響，因此自變量為是否加入Y，乙組細胞培養(yǎng)液中加入等量無菌生理鹽水，則甲組細胞培養(yǎng)液中應(yīng)加入等量Y．已知基因X表達與肝腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，而基因X的表達包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個步驟，抗癌藥物Y的作用可能是抑制基因X的轉(zhuǎn)錄過程，也可能是抑制其翻譯過程，因此通過分別檢測基因X在甲、乙兩組細胞中的mRNA或相關(guān)蛋白質(zhì)合成水平的差異，可以確定Y的藥效．
故答案為：
（1）血清可以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)   維持培養(yǎng)液pH
（2）篩選雜交瘤細胞
（3）使每個小孔內(nèi)不多于一個細胞，達到制備單克隆培養(yǎng)的目的（或單一細胞培養(yǎng)以保證抗體純度）
（4）滅活的病毒      無限增殖、能分泌特異性抗體
（5）不能  沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞
（6）等量的藥物Y        mRNA       蛋白質(zhì)

點評 本題以單克隆抗體制備流程階段示意圖為載體，考查單克隆抗體制備的過程，動物細胞培養(yǎng)的條件，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運用所學知識，對生物學問題作出準確的判斷，難度適中．