Question

8．埃博拉出血熱是一種由埃博拉病毒引起的急性傳染病，建立良好特異性的檢測(cè)方法非常重要．埃博拉病毒核蛋白NP具有很強(qiáng)的抗原性，是診斷研究的重要靶點(diǎn)．
（1）鼠源抗NP蛋白的單克隆杭體，由鼠雜交瘤細(xì)胞分泌，抗體結(jié)構(gòu)如圖1所示，抗體通過(guò)可變區(qū)與抗原特異性結(jié)合．從鼠雜交瘤細(xì)胞中提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增鼠源抗體可變區(qū)對(duì)應(yīng)的DNA片段．
使用限制酶和DNA連接酶將鼠源抗體可變區(qū)對(duì)應(yīng)的DNA片段與能表達(dá)人源抗體恒定區(qū)部分的載體重組，導(dǎo)入人胚腎上皮細(xì)胞，從細(xì)胞培養(yǎng)液中獲取人-鼠嵌合抗體．臨床使用人-鼠嵌合抗體的優(yōu)點(diǎn)是降低免疫排斥反應(yīng)．
（2）提取埃博拉病毒的蛋白質(zhì)進(jìn)行電泳，并運(yùn)用抗原-抗體雜交，檢測(cè)人-鼠嵌合抗體的特異性．實(shí)驗(yàn)主要步驟如圖2所示，其中一抗能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合，二抗能與相應(yīng)一抗特異性結(jié)合．

注：1、2為電泳泳道，其中1為蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)，2為提取的埃博拉病毒蛋白質(zhì)；標(biāo)記二抗的AP能在顯色液中顯色．A、B、C為不同一抗、二抗處理后的三組實(shí)驗(yàn)結(jié)果．

組別	一抗來(lái)源	二抗來(lái)源	結(jié)果
①	人-鼠嵌合抗體	AP標(biāo)記的抗人抗體	Ⅰ
②	鼠雜交瘤細(xì)胞上清液	AP標(biāo)記的抗鼠抗體	Ⅱ
③	普通人胚腎上皮細(xì)胞培養(yǎng)液	AP標(biāo)記的抗人抗體	Ⅲ

實(shí)驗(yàn)記錄如上表，AP標(biāo)記的抗人抗體能與嵌合抗體中的人源恒定區(qū)結(jié)合，AP標(biāo)記的抗鼠抗體能與鼠源抗體結(jié)合．若表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ依次對(duì)應(yīng)結(jié)果分析中的A、B、C（一種方案即可），則表明該人-鼠嵌合抗體能用于埃博拉出血熱的應(yīng)急血清學(xué)檢測(cè)．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)（全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)）擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）逆轉(zhuǎn)錄是指以RNA為模板合成cDNA，因此需要從鼠雜交瘤細(xì)胞中提取RNA．體外擴(kuò)增鼠源抗體可變區(qū)對(duì)應(yīng)的DNA片段利用PCR 技術(shù)．構(gòu)建重組DNA分子（基因表達(dá)載體）需要用同一種限制酶切割運(yùn)載體和目的基因，之后用DNA連接酶連接．在基因水平上對(duì)抗體進(jìn)行重組，將鼠源抗體可變區(qū)對(duì)應(yīng)的DNA片段與能表達(dá)人源抗體恒定區(qū)部分的載體重組，導(dǎo)入人胚腎上皮細(xì)胞，從細(xì)胞培養(yǎng)液中獲取人恒定區(qū)-鼠可變區(qū)嵌合抗體，即人-鼠嵌合抗體．臨床使用人-鼠嵌合抗體對(duì)人體的不良反應(yīng)減少，即優(yōu)點(diǎn)是降低免疫排斥反應(yīng)．
（2）根據(jù)題意和圖示分析可知：不同一抗、二抗處理后的三組實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，只有A、B中標(biāo)記二抗的AP能在顯色液中顯色，說(shuō)明含有相應(yīng)抗原；而C中標(biāo)記二抗的AP不能在顯色液中顯色，說(shuō)明不含有相應(yīng)抗原，即來(lái)源于普通人胚腎上皮細(xì)胞培養(yǎng)液．因此，表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ依次對(duì)應(yīng)結(jié)果分析中的A、B、C，則表明該人-鼠嵌合抗體能用于埃博拉出血熱的應(yīng)急血清學(xué)檢測(cè)．
故答案為：
（1）RNA    PCR   限制酶和DNA連接酶     鼠      人  降低免疫排斥反應(yīng)
（2）A     B          C

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程和單克隆杭體的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具及操作步驟中，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．