Question

如圖是將人的生長激素基因?qū)�入細菌B細胞內(nèi)制造“工程菌”示意圖，所用載體為質(zhì)粒A。已知細菌B細胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒A導入細菌B后，其上的基因能得到表達，探究：

(1)如何將目的基因和質(zhì)粒相結合形成重組質(zhì)粒(重組DNA分子)?                               。

(2)目前把重組質(zhì)粒導入細菌細胞時，效率還不高；導入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導入質(zhì)粒，有的導入的是普通質(zhì)粒A，只有少數(shù)導入的是重組質(zhì)粒。此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導入了質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒：將得到的細菌涂抹在一個含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導入質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的，反之則沒有。使用這種方法鑒別的原因是                                  。

(3)若把通過鑒定證明導入了普通質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的細菌放在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，會發(fā)生的現(xiàn)象是                                            。

(4)導入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是什么?                        

Answer 1

（1）①用一定的限制酶切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個有黏性未端的切口。②用同種限制酶切割目的基因，產(chǎn)生相同的黏性未端。③將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處再加入適量的DNA連接酶，使質(zhì)粒與目的基因結合成重組質(zhì)粒。

（2）普通質(zhì)粒A和重組質(zhì)粒都含有抗氨芐青霉素基因

（3）有的能生長；有的不能生長。導入普通質(zhì)粒A的細菌能生長，因普通質(zhì)粒A上有抗四環(huán)素基因；導入重組質(zhì)粒的細菌不能生長，因為目的基因插在抗四環(huán)素基因中，使其結構被破壞。

（4）基因成功表達的標志是受體細胞通過轉錄和翻譯過程合成出相應的蛋白質(zhì)，即人的生長激素。

解析:

（1）形成重組質(zhì)粒的過程：用一定的限制酶切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個有黏性未端的切口。→用同種限制酶切割目的基因，產(chǎn)生相同的黏性未端→將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處再加入適量的DNA連接酶，使質(zhì)粒與目的基因結合成重組質(zhì)粒。

（2）普通質(zhì)粒A和重組質(zhì)粒都含有抗氨芐青霉素基因，來鑒別有無質(zhì)粒成功導入大腸桿菌細胞。

（3）導入普通質(zhì)粒A的細菌能生長，因普通質(zhì)粒A上有抗四環(huán)素基因；導入重組質(zhì)粒的細菌不能生長，因為目的基因插在抗四環(huán)素基因中，使其結構被破壞，這稱為“插入破壞”。

（4）基因成功表達的標志：體細胞通過轉錄和翻譯過程合成出相應的蛋白質(zhì)，即人的生長激素。