Question

【題目】下圖表示利用PCR技術(shù)檢測受檢人是否攜帶HIV（屬逆轉(zhuǎn)錄病毒）的示意圖。請回答：

（1）組成HIV的遺傳物質(zhì)的單體是________。HIV攜帶者T細(xì)胞的核DNA能指導(dǎo)合成HIV的蛋白質(zhì)，原因是__________。

（2）設(shè)計(jì)圖中所示的引物時(shí)，應(yīng)滿足的要求是：

①引物自身不能存在互補(bǔ)配對序列，原因是避免引物自身通過折疊形成雙鏈區(qū)；

②引物之間不能存在_______________，原因是避免兩引物結(jié)合成雙鏈；

③_______________________________。

（3）在PCR反應(yīng)體系中，除具備緩沖液、模板DNA分子和引物外，還應(yīng)有______（選填編號(hào)）。

①Taq酶， ②dNTP（dCTP、dATP、dGTP和dTTP）， ③四種堿基， ④ATP， ⑤氨基酸。

（4）利用基因工程方法制備HIV的某蛋白（目的蛋白）時(shí)，需使用DNA連接酶來構(gòu)建基因表達(dá)載體。其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是______DNA連接酶，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是______________�；�因表達(dá)載體必須有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，該部位稱為__________。

Answer 1

【答案】 核糖核苷酸 HIV 的RNA 逆轉(zhuǎn)錄出的DNA 能整合到T 細(xì)胞的核DNA 中，且能被正常轉(zhuǎn)錄翻譯 互補(bǔ)配對序列 引物只能和HIV 逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA 序列互補(bǔ)配對 ①② T4 磷酸二酯鍵 啟動(dòng)子

【解析】本題考查基因工程相關(guān)知識(shí)，解題要點(diǎn)是識(shí)記基因工程的原理、基本工具和操作程序。

（1）HIV（屬逆轉(zhuǎn)錄病毒）的遺傳物質(zhì)是RNA，組成單體是核糖核苷酸；由于HIV 的RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄出的DNA 能整合到T 細(xì)胞的核DNA 中，且能被正常表達(dá)，故HIV攜帶者T細(xì)胞的核DNA能指導(dǎo)合成HIV的蛋白質(zhì)。

（2）為避免兩引物結(jié)合成雙鏈，引物之間不能存在互補(bǔ)配對序列；由于該PCR過程的目的是檢測被測者細(xì)胞中是否有HIV逆轉(zhuǎn)錄成的DNA，故引物只能和HIV 逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA 序列互補(bǔ)配對。

（3）PCR即體外DNA擴(kuò)增，原理是DNA復(fù)制，所以在PCR反應(yīng)體系中，除具備緩沖液、模板DNA分子和引物外，還要4種dNTP混合物和Taq DNA聚合酶。

（4）T4 DNA連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端；DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵；DNA上被RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位稱為啟動(dòng)子。

[點(diǎn)睛]：本題解題關(guān)鍵是：1.對PCR技術(shù)的原理和反應(yīng)過程的識(shí)記，注意設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循的原則：①引物長度；②引物擴(kuò)增跨度；③引物堿基；④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ)；⑤引物的特異性等； 2.分析圖示，提取信息，結(jié)合教材用規(guī)范性的語言答題。